川崎病の病因の遺伝子学的な独創的手法による解明とその展開

• 研究課題/領域番号: 09877145
• 研究種目: 萌芽的研究
• 配分区分: 補助金
• 研究分野: 小児科学
• 研究機関: 岐阜大学
• 研究代表者: 近藤 直実 岐阜大学, 医学部, 教授 (50124714)
• 研究期間 (年度): 1997 – 1998
• 研究課題ステータス: 完了 (1998年度)
• 配分額: 1,900千円 (直接経費: 1,900千円); 1998年度: 600千円 (直接経費: 600千円); 1997年度: 1,300千円 (直接経費: 1,300千円)
• キーワード: 川崎症 / B.細胞株 / VDJ領域 / CDR3 / B細胞株

研究概要

本研究の目的はユニークな手法を用いて川崎病の病因を明らかにすることである。
平成10年度は
(1) 川崎病患者でみられる抗体をコードしている免疫グロブリン遺伝子を決定するために川崎病患者末消リンパ球からEpstein-Barrウイルスを用いてB細胞株を樹立した。さらにlimited dilution法によりクローニングを試みた。B細胞株や末梢リンパ球から独立してDNAおよびRNAを採集し、RNAからはcDNAを作成した。DNAまたはcDNAを用いて、免疫グロブリン遺伝子のvariable regionのVDJとconstant region のCγ部分のprimerを設定して、PCRまたはRT-PCRを用いて増巾させ、増巾バンドをPC19ベクターにてクローニングした。これから川崎病において使用されているV領域,CDR3領域の塩基配列の特性を決定し、さらにアミノ酸配列を決定した。
(2) 川崎病におけるV領域のアミノ酸配列からコンピューターを用いて系統樹を作成したところ予想に反して幅広く分布していたが、一部に集積の傾向が認められた。この集積性が他の既知の抗原に対する抗体タンパクのV領域といかなる差異を有するか更に検討をすすめており、興味ある結果が得られつつある。
以上の結果をもとに現在、(1)決定された塩基配列を有するVDJ-Cγを発現ベクターに組み込んで大腸菌でタンパク、すなわち抗体を作成し(2)さらに作成した川崎病特異抗体を用いた検索から川崎病の病因を確定するためカラムによる抗体吸着と(3)既存の抗原に対比してV領域アミノ酸をコンピューター分析しており、これらから結論を得る。

研究成果

• [文献書誌] Kondo N et al: "Cord blood lymphocyte responses to antigens for the prediction of allergy." Pediatric Asthma Allergy & Immunology. 12. 61-66 (1998)
• [文献書誌] Kondo N et al: "Dnase I hypersensitive sites in himan I ε reyion of Immunolobulin heavy chain genes abnomally induced by interleuking in Bly-phocytes of atopic pattents with high levels of serum IgE." J Invest Allergol & Clin Immunol. 8. 234-238 (1998)
• [文献書誌] Kaneko H, Kondo N et al: "BLM(the causative gene of Bloom syndrome)protein translocation into the nucleus by a nuclear lacaligation signal." Biochem Biophysical Res Commun. 240. 348-353 (1997)
• [文献書誌] Tashita H, Kondo N et al: "Molecular basis of selective IgG2 deficiency : The mutated membrane-bound form of γ2 heavy chain caused vomplete IgG2 deficiency in two Japanese siblings." J Clin Invest. 101. 677-681 (1998)
• [文献書誌] Fukao T, Kondo N et al: "Ataxia telangiectasia in the Japanese population : identification of R1917X,W2991R,R2909G,IVS33+2T+A,and 788 del5,the latter two being relatively common mutations." Hum Mutat. 12. 338-343 (1998)
• [文献書誌] Kondo N et al: "Reduced interferon gamma production by antigen stimulated cord blood mononuclear cells is a risk factor of allergic disorders. -6 year follow-up study." Clin Exp Allergy. 28. 1340-1344 (1998)
• [文献書誌] 近藤直実: "現代内科学 原発性免疫不全症候群 (1)抗体不全を主とする疾患" 金芳堂, 2384 (1997)
• [文献書誌] 近藤直実: "分子アレルギー学 : アトピーIgE遺伝子" メディカルレビュー社, 599 (1998)
• [文献書誌] Kondo N et al: "Reduced expression of the interferon-gamma messenger RNA in IgG2 deficiency." S J Immurol. 45. 227-230 (1997)
• [文献書誌] Kondo N et al: "Proliferative responses of lymphocytes to food antigens are useful for detection of allergens in nonimmediate type of food allergy." J Invest Allergol Clin Immunol. 7. 122-126 (1997)
• [文献書誌] Inoue R et al: "Idenrification of dermatphagoides farinae-2-Derived peptides and class II HLA molecules recognized by T cell form atopic individuals." Int Arch Allergy Immunol. 114. 354-360 (1997)
• [文献書誌] Kaneko H et al: "BLM(the causative gene of Bloom syndrome)protein translocation into the nucleus by a nuclear lacalization signal." B B R C. 240. 348-353 (1997)
• [文献書誌] Kaneko H et al: "Two Japanese siblings with with Bloom syndrome gene mutation and B cell lymphoma." Leukemia and Lymphoma. 27. 539-542 (1997)
• [文献書誌] Tashita H et al: "Molecular basis of selective IgG2 deficiency:The mutated membrane-bound form of γ2 heavy chain caused complete IgG2 deficiency in two Japanese siblings." J Clin Invest. (印刷中).
• [文献書誌] 近藤直実: "標準小児科学:免疫疾患" 医学書院, 655 (1997)
• [文献書誌] 近藤直実: "新内科学教科書:原発性免疫不全症候群" 金芳堂, (印刷中