IDDMの遺伝子療法:自家骨髄移植による基礎インスリン補償

• 研究課題/領域番号: 09877196
• 研究種目: 萌芽的研究
• 配分区分: 補助金
• 研究分野: 内分泌・代謝学
• 研究機関: 大阪大学
• 研究代表者: 花房 俊昭 大阪大学, 医学部, 講師 (60164886)
• 研究分担者: 中島 弘 大阪大学, 医学部, 助手 (50252680) ; 宮川 潤一郎 大阪大学, 医学部, 助手 (00127721) ; 難波 光義 大阪大学, 医学部, 講師 (00183533)
• 研究期間 (年度): 1997 – 1998
• 研究課題ステータス: 完了 (1998年度)
• 配分額: 1,900千円 (直接経費: 1,900千円); 1998年度: 900千円 (直接経費: 900千円); 1997年度: 1,000千円 (直接経費: 1,000千円)
• キーワード: 遺伝子治療 / 糖尿病 / インスリン / 骨髄移植 / レトロウイルス / プロインスリン / マウス

研究概要

昨年度、1)マウスにおいて、human proinsulinはhuman insulinに対し1/50程度のbioavailabilityを保持することを明らかにし、2)ヒト膵組織より作製したpreproinsulincDNAのconstructを挿入したretrovirus vectorを作製し、producer細胞を得た。
それに引き続き、今年度は、moloney白血病ウイルス由来のレトロウイルスベクターpGK,pRxにhuman insulinおよびコントロールのconstructを挿入して作成した、合計4種類のretrovirus vectorを、lipofection法を用いてpackaging細胞にtransfectし、G418によるselectionを行って、各々約20クローンのproducer胞株を樹立した。pGk vetorはNeO耐性遺伝子を持たないため、Neo遺伝子をもったplasmid vector(pRc/CMV)をco-transfectした。
producer細胞の一部のcloneについてプロインスリン/インスリン抗体を用いた免疫染色を施行した。pGk vectorをtransfectしたproducer細胞では、挿入した配列よりimmunoreactive proinsulinが産生されることが確認された。また、培養上清のインスリン濃度をEIAL法により測定し、immunoreactive proinsulinの産生を確認した。

研究成果

• [文献書誌] Yoshiuchi I, et al.: "Mutation/polymorphism scanning of glucose-6-phosphatase gene promoter in non-insulin dependent diabetes mellitus patients." J. Clin. Endocrinol. Metab.83,3. 1016-1019 (1998)
• [文献書誌] Iwahashi H, et al.: "Molecular mechanisms of pancreatic beta-cell destruction in auto-immune diabetes: Potential targets for preventive therapy." Cytokines, Cellular & Molecular Therapy. 4. 45-51 (1998)
• [文献書誌] Yamagata K, et al.: "Mutation P291fsinsC in the transcription factor hepatocyte ; a nuclear factor-1a is dominant negative." Diabetes. 47,8. 1231-1235 (1998)
• [文献書誌] Iwahashi.H, et al.: "Emerging therapeutic strategies in autoimmune diabetes:etiology, prediction, prevention and cure." Emarging Therapeutic Targents. in press. in press (1999)
• [文献書誌] Yoshiuchi I, et al.: "Three new mutations in the hepatocyte nuclear factor-1a gene in Japanese subjects with deabetes mellitus." Diabetologia. in press. in press (1999)
• [文献書誌] Imagawa A, et al.: "In situ immunological abnormalities in islets parallelled further deterioration of glycemic control in recent-onset type1 deabetes." Diabetologia. in press. in press (1999)
• [文献書誌] Itoh,N., et al.: "Requirement of Fas for the development of autoimmune diabetes in non-obese diabetic mice." J.Exp.Med.186,4. 613-618 (1997)
• [文献書誌] Yamamoto,K.et al.: "Differentiation of B-cells fromductal cells and acceleration of this process by nicotinamide." Biomed.Res.18,2. 171-178 (1997)
• [文献書誌] Yamamoto,K., et al.: "Proliferation and differentiation of pancreatic B-cells." Med.Electron.Microsc.30. 170-175 (1997)
• [文献書誌] Waguri,M., et al: "Demonstration of two different processes of B-cell regeneration in a new diabetic mouse model induced by selective perfusion of alloxan." Diabetes. 46,8. 1281-1290 (1997)
• [文献書誌] Iwahashi,H., et al.: "Synergistic anti-apoptotic activity between Bc1-2 and SMN implicated in spinal muscular atrophy." Nature. 390. 413-417 (1997)
• [文献書誌] Yoshiuchi,I., et al.: "Mutation/polymorphism scanning of glucose-6-phosphatase gene promoter in non-insulin dependent diabetes mellitus patients." J.Clin.Endocrinol.Metab.in press. (1998)