| 研究課題/領域番号 |
10044047
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| 研究種目 |
国際学術研究
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 共同研究 |
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| 研究分野 |
生物有機科学
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| 研究機関 | 北海道大学 |
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研究代表者 |
西村 紳一郎 北海道大学, 大学院・理学研究科, 教授 (00183898)
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| 研究分担者 |
西 則雄 北海道大学, 大学院・地球環境科学研究科, 教授 (70001857)
LEE Yuan C. ジョンズホプキンス大学, 生物学科, 教授
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| 研究期間 (年度) |
1998
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| 研究課題ステータス |
完了 (1998年度)
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| 配分額 *注記 |
1,000千円 (直接経費: 1,000千円)
1998年度: 1,000千円 (直接経費: 1,000千円)
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| キーワード | エネルギートランスファー / シアリルトランスフェラーゼ / β-1,4-ガラクトシルトランスフェラーゼ / UDP-Gal / CMP-NANA / フルオエッセンス(蛍光) / ナフチル基 / ダンシル基 |
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| 研究概要 |
生体内で重要な働きをしている糖転移酵素はその分布活性を調べるのが困難である。このことが糖鎖機能や生合成システムの謎を解明する妨げとなっている。たとえば、受精や老化等の様々な生命現象の解明を遅らせている。
そのため、この反応を容易に測定できる可能性の高いエネルギートランスファーの手法を用いることを試みた。これは酵素の二つの基質間の蛍光強度の変化を測定するだけで酵素活性を測定することができる方法で、非常に簡単で放射能を使わないので安全である。このために蛍光ラベルをした種々の糖転移酵素の基質を合成した。
現在までターゲットにした糖転移酵素はβ-1,4-ガラクトシルトランスフェラーゼとシアリルトランスフェラーゼである。
β-1,4-ガラクトシルトランスフェラーゼの基質についてはガラクトースの6位をナフチルアミンで蛍光ラベルしたUDP-Galとナフチルメチルアミンで蛍光ラベルしたUDP-Galの合成に成功した(蛍光ドナー)。また、モノマー型またはポリマー型でグルコサミンの1位にスペーサーを挟んで(β型)ダンシル基で蛍光ラベルした化合物を合成した(蛍光アクセプター)。前者の蛍光ドナーを用いた場合は、見事に酵素活性を測定することができたが、エネルギートランスファーの効率が悪く、後者はナフチルメチル基が立体障害となったためか、糖転移反応が起こらなかった。このため2位にナフチルメチル基を導入したUDP-Galを合成した。
シアリルトランスフェラーゼの基質については、9位にナフチルメチル基を導入したCMP-NANAの合成に成功した(蛍光ドナー)。また、1位にスペーサーを挟んで(β型)ダンシル基を導入したガラクトースを合成した(蛍光アクセプター)。これらの基質を使って酵素活性を測定した。
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