| 研究課題/領域番号 |
10044208
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
分子生物学
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| 研究機関 | 奈良先端科学技術大学院大学 |
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研究代表者 |
真木 寿治 奈良先端科学技術大学院大学, バイオサイエンス研究科, 教授 (20199649)
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| 研究分担者 |
梅津 桂子 奈良先端科学技術大学院大学, バイオサイエンス研究科, 助手 (20223612)
秋山 昌広 奈良先端科学技術大学院大学, バイオサイエンス研究科, 助教授 (80273837)
関 峰秋 奈良先端科学技術大学院大学, バイオサイエンス研究所, 教務職員 (40304167)
松本 吉博 Fox Chase Cancer Center, Associate
FUCHS Robert CNRS, URR9003, Director
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| 研究期間 (年度) |
1998 – 1999
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| 研究課題ステータス |
完了 (1999年度)
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| 配分額 *注記 |
3,800千円 (直接経費: 3,800千円)
1999年度: 1,700千円 (直接経費: 1,700千円)
1998年度: 2,100千円 (直接経費: 2,100千円)
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| キーワード | DNAポリメラーゼ / 発がん物質 / 変異原 / DNA複製 / DNA修復 / 誤りがち修復 / SOS応答 / SOS修復 |
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| 研究概要 |
本研究計画での主要な問題点は生物に普遍的に存在するDNA損傷部位でのバイパスDNA合成による突然変異の発生機構について、その過程に関与するDNAポリメラーゼ等のタンパク質性因子の役割を明らかにし、バイパスDNA合成に起因する突然変異の制御の仕組みを解明することである。2年度にわたる期間で以下の3つの項目について研究を実施し、新たな知見を得た。
1.試験管内DNA合成系を用いた変異解析法の確立:大腸菌のDNA複製酵素を用いた試験管内DNA合成系を確立し、rpsL標的遺伝子配列上に生じた突然変異の特徴を明らかにした。その結果、損傷を人為的に導入していない鋳型DNAを用いた場合にも鋳型の特定の部位に生じた自然DNA損傷により塩基置換が誘発されることが強く示唆された。また、複製酵素が最も高頻度に引き起こす複製エラーである1塩基フレームシフト変異は同じ塩基が続く配列で特異的に発生することが示された。
2.試験管内DNA合成系を用いたDNA鎖伸長反応ポージング部位の解析:突然変異の発生におけるDNA合成阻害の意義を探る目的で、M13ファージ単鎖DNA上での大腸菌複製酵素のポージング部位について詳細な解析を行った。その結果、M13ゲノム上に強力なポージング領域が8ヶ所見出されたが、塩基配列レベルではそれぞれの領域は複数のポージング部位から構成されていることが判明し、それらの半数はヘアピン構造を取ることが明らかにされた。
3.バイパスDNA合成に関連する諸因子の同定と精製:高等真核生物でのバイパスDNA合成を検討するために、アフリカツメガエル卵母細胞抽出液中でのバイパスDNA合成活性を検討したところ、そのような活性が存在することが見出された。部分精製および異なるDNA損傷を持つ鋳型DNAでの解析から、バイパスDNA合成には少なくとも3つの異なる経路が存在することを見出した。
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