• 研究課題をさがす
  • 研究者をさがす
  • KAKENの使い方
  1. 前のページに戻る

カイコシステインプロテアーゼ(BCP):x-線結晶解析と活性化機構に関する研究

研究課題

研究課題/領域番号 10044210
研究種目

基盤研究(B)

配分区分補助金
応募区分一般
研究分野 動物生理・代謝
研究機関山口大学

研究代表者

高橋 進  山口大学, 農学部, 教授 (90022665)

研究分担者 景山 節  京都大学, 霊長類研究所, 教授 (20027501)
山本 芳実 (山本 芳美)  山口大学, 農学部, 助教授 (40115514)
渡部 省二  山口大学, 農学部, 助教授 (30113020)
RAIKHEL A.S.  ミシガン大学, 遺伝学研究所, 教授
BOWNES M.  エディンバラ大学, 分子研究所, 教授
研究期間 (年度) 1998 – 1999
研究課題ステータス 完了 (1999年度)
配分額 *注記
10,200千円 (直接経費: 10,200千円)
1999年度: 5,000千円 (直接経費: 5,000千円)
1998年度: 5,200千円 (直接経費: 5,200千円)
キーワードシステインプロテアーゼ / BCP / 活性化機構 / カイコ / 立体構造 / ProBCP / 活性化 / 阻害剤
研究概要

現在プロテアーゼはその活性中心のアミノ酸より4種類に分類されている.すなわち1)セリン、2)アスパラギン酸、3)メタロ、4)システインプロテアーゼである.それらのうちシステインプロテアーゼは活性化の機構が不明である.本研究ではこの解決をめざした.活性化の機構を知るためにはその立体構造を知ることは不可欠であるため、X-線結晶解析、CD スペクトル、高圧電子顕微鏡による観察、カイネテイクスなど多様な方法を用いた.また、これらの研究を進めるためには、大量の酵素蛋白が必要なために精製のみでは不十分でバクテリアをもちいた遺伝子の発現システムが必要である.これらを併せて検討した.今回得られた結果は以下のとおりである.
1、大腸菌を用いた大量発現システムを確立できた.
2、酵素化学的研究から、活性化の機構はIntra-molecular-reactionでありSequentialにN-末端からプロペプチドが切断され離脱し、活性化がおこることが判明した.これは精製された酵素を用いた実験としては、世界ではじめてである.これにともないCDスペクトルによる観察ではヘリックス構造が大幅に変化することが判明し、立体構造におおきな変化がおこることが予想された.
3、酵素前駆体の立体構造に関しては、主として、CDスペクトル、超高圧電子顕微鏡、X-線結晶構造解析により解析した.いずれも成功裏に終了し、とりわけ高圧電子顕微鏡による観察では世界ではじめてそのオリゴマー構造を立証した.
4、そのた、実験中にこれまでに全く知られていなかった新しいシステインプロテアーゼ阻害蛋白質を発見しその精製、cDNAクローニング、塩基、アミノ酸配列の決定、阻害機構の予備的結果をえた.

報告書

(3件)
  • 1999 実績報告書   研究成果報告書概要
  • 1998 実績報告書
  • 研究成果

    (27件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (27件)

  • [文献書誌] YAMAMOTO,Y.,Watanabe,S YAMHAMA,Y.,TAKAHASHI,S.Y.: "Bombyx acid cysteine protease(BCP):Hormonal regulation of biosynthesis and accumulation in the overy"J.INSECT PHYIOL.. 46. 783-791 (2000)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1999 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] YAMAMOTO,Y.,WATANABE,S.KAGEYAMA,T.TAKAHASHI,S.: "A novel inhibitor for bombyx systeine proteinase is homologous to propeptide reguons of cysteine proteinases"FEBS,Lett.. 448. 257-260 (1999)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1999 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] YAMAMOTO,Y.他: "Punification and charactenzation of Bombyx cycteine proteinase(BCP) specfic inhibitors from hemolymph of Bombyx morl"ARCH.INSECT BIOCHEM.PHYSIOL.. 41. 119-129 (1999)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1999 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] YAMAMOTO,Y.他: "Proregion of Bomyx mori cysteine proteinase functions as an intramolecular chaperone to promote proper folding of the mature enzyme"ARCH.INSECT BIOCHEM.PHYSIOL.. 42. 167-178 (1999)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1999 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] WATANABE,S.他: "Mitochondrial thioredoxin reductase in bovine adrena cortex.Its purification,properties,nuleotide/amino acid aequences,and identification of selenocysteine"EUR.J.BIOCHEM.. 264. 74-84 (1999)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1999 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] INOKUMA,H.他: "Duration of antibodies against 24 kDa protein of Rhipicephalus sanguineus extract dogs infested with adult ticks"J.vet.MED.SCI.. 61. 179-181 (1999)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1999 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] YAMAMOTO, Y., YAMAHAMA, Y., WATABE, S. and TAKAHASHI, S. Y.: "Bombyx acid cysteine protease (BCP) : Hormonalregulation of biosynthesis and accumulation in the ovary."J. Insect Physiol.. 46. 783-791 (2000)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1999 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] YAMAMOTO, Y., WATANABE, S., KAGEYAMA, T. and TAKAHASHI, S. Y.: "A novel inhibitor for Bombyx cysteine proteinase is homologous to propeptide regions of cysteine proteinases."FEBS, Lett.. 448. 257-260 (1999)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1999 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] YAMAMOTO, Y., WATANABE, S., KAGEYAMA, T. & TAKAHASHI, S. Y.: "Purification and characterization of Bombyx cycteine proteinase(BCP) specific inhibitors from the hemolymph of Bombyx mori."Arch. Insect Biochem.. Physio. 41. 119-129 (1999)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1999 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] YAMAMOTO, Y., WATANABE, S., KAGEYAMA, T. and TAKAHASHI, S. Y.: "Proregion of Bombyx mori cysteine proteinase functions as an intra-molecular chaperone to promote proper folding of the mature enzyme.."Arch. Insect Biochem. Physiol.. 42. 167-178 (1999)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1999 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] WATANABE, S., MAKINO, Y., OGAWA, K., HIROI, T., YAMAMOTO, Y. and TAKAHASHI, S. Y.: "Mitochondrial thioredoxin reductase in bovine adrenal cortex. Its purification, properties, nucleotide/amino acid sequences, and identification of selenocysteine."Eur. J. Biochem.. 264. 74-84 (1999)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1999 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] INOKURA, H., NUKAI, M., OHNO, K., YAMAMOTO, Y., TAKAHASHI, S. Y. & OHNISHI, T.: "Duration of antibodies against 24 kDa protein of Rhipicephalus sanguineus extract in dogs infested with adult ticks."J. vet. Med. Sci.. 61. 179-181 (1999)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1999 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] YAMAMOTO,Y.,Watabe,S. YAMHAMA,Y.,TAKAHASHI,S.Y.: "Bombyx acid cysteine protease(BCP):Hormonal regulation of biosynthesis and accumulation in the ovary.J.Insect Physiol.46,783-791."J.INSECT PHYIOL.. 46. 783-791 (2000)

    • 関連する報告書
      1999 実績報告書
  • [文献書誌] YAMAMOTO,Y.,Watabe,S. KAGEYAMA,T.TAKAHASHI,S.: "A novel inhibitor for Bombyx cysteine proteinase is homologous to propeptide regions of cysteine proteinases.FEBS,Lett.448,257-260."FEBS,Lett.. 448. 257-260 (1999)

    • 関連する報告書
      1999 実績報告書
  • [文献書誌] YAMAMOTO,Y.他: "Purification and characterization of Bombyx cycteine proteinase(BCP)specific inhibitors from the hemolymph of Bombyx mori. Arch. Insect Biochem,Physiol."ARCH.INSECT BIOCHEM.PHYSEOL.. 41. 119-129 (1999)

    • 関連する報告書
      1999 実績報告書
  • [文献書誌] YAMAMOTO,Y.他: "Proregion of Bomyx mori cysteine proteinase functions as an intramolecular chaperone to promote proper folding of the mature enzyme.Arch."ARCH.INSECT BIOCHEM.PHYSIOL. 42. 167-178 (1999)

    • 関連する報告書
      1999 実績報告書
  • [文献書誌] WATABE,S.他: "Mitochondrial thioredoxin reductase in bovine adrenal cortex. Its purification,properties,nucleotide/amino acid sequences,and identification or ***"EUR.J.BIOCHEM.. 264. 78-84 (1999)

    • 関連する報告書
      1999 実績報告書
  • [文献書誌] INOKUMA,H.他: "Duration of antibodies against 24 kDa protein of Rhipicephalus sanguineus extract in dogs infested with adult ticks.J.vet.Med.Sci.64,179-181"J.vet.MED.SCI.. 61. 179-181 (1999)

    • 関連する報告書
      1999 実績報告書
  • [文献書誌] 高橋進: "生きもののからくり(中村、高橋編)、第1章1〜13ページ"培風館. 215 (1998)

    • 関連する報告書
      1999 実績報告書
  • [文献書誌] 渡部、山本、高橋: "最新電気泳動実験法;オートラジオグラフィーの実際"医歯薬出版、日本電気泳動学会編. 470 (1999)

    • 関連する報告書
      1999 実績報告書
  • [文献書誌] 猪熊,高橋: "Duration of antibodies against 24kDa protein of Rhipicephalus sanguineus extract in dogs infested with the adult ticks" J.vet.med.Sci. 61. 179-181 (1999)

    • 関連する報告書
      1998 実績報告書
  • [文献書誌] 加藤,高橋: "Ca2+-dependent phosphorylation and proteolysis of tetrahydrobiopterin generating enzymes." Pteridines. (in press). (1999)

    • 関連する報告書
      1998 実績報告書
  • [文献書誌] 山本,渡部,高橋: "A novel inhibitor protein for Bombyx cysteine protease (BCP) is homologous to propeotide regions of cysteine proteases" FEBS Lett. (in press). (1999)

    • 関連する報告書
      1998 実績報告書
  • [文献書誌] 山本,渡部,高橋: "Propeptide region of Bombyx cyctein protease (BCP) functions as a chaperone-like protein to romote proper folding of the mature enzyme." Arch.Insect Biochem & Physiol. (in press). (1999)

    • 関連する報告書
      1998 実績報告書
  • [文献書誌] 山本,渡部,高橋: "Purification and characterization of Bombyx cysteine protease (BCP) specific inhibitors from the hemolymph of Bombyx mori." Arch.Insect Biochem & Physiel.(in press). (1999)

    • 関連する報告書
      1998 実績報告書
  • [文献書誌] 中村,高橋: "生きもののからくり" 培風館(中村 高橋共編), 215 (1998)

    • 関連する報告書
      1998 実績報告書
  • [文献書誌] 渡部,山本,高橋: "医歯薬出版,(日本電気泳動学会偏)" 電気泳動実験法=オートラジオグラフィーとその実際, 470 (1999)

    • 関連する報告書
      1998 実績報告書

URL: 

公開日: 1998-04-01   更新日: 2021-08-31  

サービス概要 検索マニュアル よくある質問 お知らせ 利用規程 科研費による研究の帰属

Powered by NII kakenhi