| 研究概要 |
昆虫の脱皮・変態において中心的な役割を担う前胸腺刺激ホルモン(PTTH)の立体構造決定を目的として、立体構造解析の標的としての各種PTTH分子の妥当性の評価、および、^<13>C,^<15>N標識Manduca PTTHの調製と多核多次元NMRの測定と解析を行った。
1. 立体構造解析の標的としての各種PTTH分子の妥当性の評価
非還元条件でのSDS-PAGE分析において、Bombyx PTTHは泳動度が小さくスメアだが、Manduca PTTHは泳動度が大きくシャープなバンドを形成する(松林秀貴、私信)。このことから、Manduca PTTHはBombyx PTTHに比べて、均一性が高くコンパクトな高次構造を有することが示唆された。ゆえに標的分子としてManduca PTTHを選択した。
2. ^<13>C,^<15>N標識Manduca PTTHの調製と多核多次元NMRの測定と解析
^<13>C,^<15>N標識Manduca PTTHを21のM9最少培地から1.4mg得た。スピン-スピン結合した^1Hと^<15>Nの相関を検出するHSQCスペクトルを測定・解析した結果、Manduca PTTHが、β構造に富む二次構造を持つこと、および、分子内で運動性の低い領域(rigidな高次構造をとる)と高い領域(flexibleで特定の高次構造を持たない)とに分けられることが示された。この結果から、NMR法によるManduca PTTH分子の立体構造決定が成功するめどがついた。現在、^1H-^<13>C-^<15>N三重共鳴三次元NMRの測定と解析を進めている。
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