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紫外線損傷DNAを特異的に認識する抗体分子の機能の改変

研究課題

研究課題/領域番号 10165201
研究種目

特定領域研究(A)

配分区分補助金
研究機関北海道大学

研究代表者

森岡 弘志  北海道大学, 大学院・薬学研究科, 助教授 (20230097)

研究期間 (年度) 1998
研究課題ステータス 完了 (1998年度)
配分額 *注記
1,900千円 (直接経費: 1,900千円)
1998年度: 1,900千円 (直接経費: 1,900千円)
キーワード紫外線 / 損傷塩基 / (6-4)光産物 / オリゴヌクレオチド / バイオセンサー / Dewar型異性体 / 1本鎖抗体
研究概要

以下に,今年度得られた新たな知見等の成果を示す.
(1) Dewar型異性体を特異的に認識するDEM-1抗体の可変領域部遺伝子のクローニングを行い,その塩基配列およびアミノ酸配列を決定した.重鎮(H鎖)中にシステイン残基の存在が確認された.(2) Dewar型異性体特異的1本鎖抗体(DEM1scFv抗体)遺伝子の構築(VH-linker-VL型およびVL-linker-VH型)および大腸菌システムによる大量調製を行った.天然型では活性を有するscFv抗体蛋白質を得ることはできなかったが,システインをセリンに置換した変異scFv抗体では活性を有していた.(3)バイオセンサー(BIAcore)を用いて,Dewar型異性体を含む合成オリゴヌクレオチドとの相互作用を速度論的に解析したところ,特異的な結合が観察され,結合速度定数kass,解離速度定数kdissならびに解離定数Kdが得られた.DEM1scFv(C47S)抗体の抗原アナログd4merに対するKd値は,2.5±0.2x10^<-7>(VH-linker-VL型),2.2±0.3x10^<-7>(VL-linker-VH型),抗原アナログd6merに対するKd値は,2,4±0.2x10^<-7>(VH-linker-VL型),2.7±0.5x10^<-7>(VL-linker-VH型)となった.DEM-1 Fabの抗原アナログd4merに対するKd値は,1.1±0.1x10^<-7>,抗原アナログd6merに対するKd値は,1.0±0.1x10^<-7>となった.以上のことから,scFv抗体はFab抗体同様の抗原結合特性を有していることが分かった.

報告書

(1件)
  • 1998 実績報告書
  • 研究成果

    (6件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (6件)

  • [文献書誌] Morioka,H.: "Antibodies specific for (6-4) DNA photoproducts: Cloning,antibody modeling and construction of a single-chain Fv derivative." Biochim.Biophys.Acta. 1385. 17-32 (1998)

    • 関連する報告書
      1998 実績報告書
  • [文献書誌] Kai,M.: "A new drosophila ultraviolet light-damaged DNA recognition endonuclease that selectively nicks a(6-4)photoproduct site." Biochim.Biophys.Acta. 1397. 180-188 (1998)

    • 関連する報告書
      1998 実績報告書
  • [文献書誌] Torizawa,T.: "^<31>P NMR study of the interactions between oligodeoxynucleotides containing (6-4) photoproduct and Fab fragments of monoclonal antibodies specific for (6-4) photoproduct." FEBS Lett.429. 157-161 (1998)

    • 関連する報告書
      1998 実績報告書
  • [文献書誌] Kobayashi,H.: "The role of surface lysines in pyrimidine (6-4) pyrimidone photoproduct binding by a high-affinity antibody." Protein Eng.11. 1089-1092 (1998)

    • 関連する報告書
      1998 実績報告書
  • [文献書誌] Kobayashi,H.: "Probing the Interaction between a high-affinity single-chain Fv and pyrimidine (6-4) pyrimidone photodimer by site-directed mutagenesis." Biochemistry. 38. 532-539 (1999)

    • 関連する報告書
      1998 実績報告書
  • [文献書誌] Kobayashi,H.: "Effects of a high-affinty antibody fragment on DNA polymerase reactions near a(6-4)photoproduct site.Photochem." Photobiol.69. 226-230 (1999)

    • 関連する報告書
      1998 実績報告書

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公開日: 1998-04-01   更新日: 2016-04-21  

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