レトロウイルスベクターによる造血幹細胞への遺伝子導入とその応用

• 研究課題/領域番号: 10181203
• 研究種目: 特定領域研究(A)
• 配分区分: 補助金
• 審査区分: 生物系
• 研究機関: 東京大学
• 研究代表者: 北村 俊雄 東京大学, 医科学研究所, 客員助教授 (20282527)
• 研究期間 (年度): 1998
• 研究課題ステータス: 完了 (1998年度)
• 配分額: 2,100千円 (直接経費: 2,100千円); 1998年度: 2,100千円 (直接経費: 2,100千円)
• キーワード: レトロウイルスベクター / レトロウイルスパーケイジング細胞 / 骨髄移植

研究概要

以前、研究代表者が開発したレトロウイルスベクターpMXに加え、pMY、pMZベクターを作成し、それぞれにcDNAとしてEGFPを組み込んだコントロールベクターで、感染効率および発現を比較した。pMX-GFPはEC細胞やES細胞での発現がよくなかったが、pMY-GFPおよびpMZ-GFPはこれら未熟な細胞中でもよく発現した。
またより安全で効率のよいパッケージング細胞を作成するため、EF-Iαプロモーター-gag-pol-IRES-puroおよびEFIαプロモーター-env-IRES-bsγの構造を持つ新たなパッケージングコンストラクトを作成した。最近、これらのパッケージングコンストラクトを利用してエコトロピックパッケージング細胞を作成し、現在効率を検定中である。またアンフォトロピックパッケージング細胞も作成予定である。
現在、作成したレトロウイルスベクターおよびパッケージング細胞を利用して、恒常的活性型MPLおよびSTATの増腫瘍性をマウスの骨髄移植モデルで検討している。

研究成果

• [文献書誌] Onishi,M.: "Cytokine receptors: Stuctures and signal transduction." Int.Rev.Immunol.16. 617-634 (1998)
• [文献書誌] Kitamura,T.: "New experimental approaches in retrovirus-mediated expression screening." Int.J.Hematol.67. 351-359 (1998)
• [文献書誌] Hata,D.: "Involvement of Bruton's tyrosine kinase in FceRI-dependent mast cell degranulation and cytokine production." J.Exp.Med.187. 1235-1247 (1998)
• [文献書誌] Morikawa,Y.: "Induction of synaptosomal-associated protein-23kd (SNAP-23) by various cytokines." Blood. 92. 129-135 (1998)
• [文献書誌] Onishi,M.: "Identification and characterization of a constitutive active STAT5 mutant that promotes cell proliferation." Mol.Cell.Biol.18. 3871-3879 (1998)
• [文献書誌] Jinno,A.: "Identification of the chemokine receptor TER1/CCR8 expressed in brain-derived cells and T-cells as a new coreceptor for HIV-1 infection." Biophys.Biochem.Res.Commun.243. 497-502 (1998)
• [文献書誌] Kawashima,T.: "Interleukin-12 induces tyrosine phosphorylation of an 85-kDa protein associated with the interleukin-12 receptor β1 subunit." Cell.Immunol.186. 39-44 (1998)
• [文献書誌] Kitamura,T.: "Activating mutations of the transmembrane domain of MPL in vitro and in vivo: Incorrect sequence of MPL-K,an alternative spliced form of MPL." Blood. 92. 2596-2597 (1998)
• [文献書誌] Dairaghi,D.J.: "RANTES-induced activation correlates with CD3 expression." J.Immunol.168. 426-433 (1998)
• [文献書誌] Duan,Y.: "Expression and functional analysis of a hemopoietic progenitor antigen,NJ-1 (114/A10),in a megakaryocytic lineage." Biochem.Biopys.Res.Commun.253. 401-406 (1998)
• [文献書誌] Kitamura,T.: "Isolation of cDNAs for T cell antigens by retrovirs-mediated expression cloning." Methods in Molecular Biology.(in press). (1999)
• [文献書誌] Nosaka,T.: "Identification and characterization of constitutively active STAT5." Molecular Biology of Hematopoiesis.(in press). (1999)
• [文献書誌] Mukasa,R.: "Core 2-containing O-glycans on CD43 are preferentially expressed in the memory subset of human CD4 T cells." Int.Immunol.(in press). (1999)
• [文献書誌] Matsumura,I.: "Involvement of cyclin D1 in STAT5-mediated cell growth." EMBO J.(in press). (1999)