| 研究課題/領域番号 |
10304065
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| 研究種目 |
基盤研究(A)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
動物生理・代謝
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| 研究機関 | 千葉大学 |
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研究代表者 |
大日方 昂 (大日方 昴) 千葉大学, 理学部, 教授 (40012413)
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| 研究分担者 |
佐藤 成樹 千葉大学, 理学部, 助手 (40261896)
阿部 洋志 千葉大学, 理学部, 助教授 (00222662)
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| 研究期間 (年度) |
1998 – 2001
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| 研究課題ステータス |
完了 (2001年度)
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| 配分額 *注記 |
37,530千円 (直接経費: 35,700千円、間接経費: 1,830千円)
2001年度: 7,930千円 (直接経費: 6,100千円、間接経費: 1,830千円)
2000年度: 5,700千円 (直接経費: 5,700千円)
1999年度: 8,500千円 (直接経費: 8,500千円)
1998年度: 15,400千円 (直接経費: 15,400千円)
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| キーワード | 筋原線維 / コフィリン / アクチン結合蛋白質 / アクチン / アクチン繊維 / 筋原線維形成 / 横紋筋 / 骨格筋 / C-蛋白質 / ミオシン結合蛋白質 / ミオシン |
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| 研究概要 |
以下の様に、多様な視点で筋収縮運動系の確立と維持の分子機構を調べた。
1.アクチン・ミオシン相互作用の役割 培養筋細胞にアクチン・ミオシン相互作用を抑制する薬剤(BDM)を投与すると、アクチン、ミオシン繊維は形成されるが、横紋形成は抑制されること、また、既に形成された横紋構造が消失することを見出した。アクチン・ミオシン相互作用が筋原線維の形成と維持に不可欠と結論した。
2.ミオシン結合蛋白質(C-蛋白質)の役割に関して 1)マウス骨格筋C-蛋白質cDNAをクローニング、筋発生に伴うC-蛋白質の発現変化を解明した。
2)マウス心筋C-蛋白質に、機能的に強弱の差がある2つの変異体の存在および、両者がマウスの月齢に依存して心筋での発現が変動することを見出した。
3)C-蛋白質分子のN端領域にアクチンと相互作用する機能ドメインの存在を、C-蛋白質の断片の組み換え体蛋白質を作成して明らかにした。
3.コフィリンの役割に関して 1)筋に重要な筋型コフィリンの筋形成過程での発現特性を、cDNAプローブおよび特異抗体を用いて明らかにした。
2)コフィリンの過剰、欠損、機能抑制の状態で筋に何が起こるかを調べ、適度なコフィリンの作用が筋原繊維形成と維持に不可欠と結論した。コフィリンの過剰状態をcDNA導入により導くと、アクチン緯緯の崩壊とロッド形成が導かれること、コフィリンの阻害因子PIP_2濃度をPIP5キナーゼのcDNA導入により高めると筋原繊維の形成阻害されること、マウスの胚操作によりコフィリン欠損筋細胞を導くと筋原線維が崩壊した筋細胞が生ずることなどを見出した。
4.適度な機械的負荷が筋原繊維形成を促す仕組みについて 培養筋細胞にストレッチング負荷を課すと細胞内Ca++が上昇、それに伴い最終的にはアクチン・ミオシン総合作用の促進により筋原繊維形成の促進に至る過程の概略を明らかにした。
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