| 研究概要 |
1.大腸菌および高度好塩菌でpharaonis phoborodopsin(ppR)の発現系の構築に成功し,タンパクの精製方法を確立した.
2.ppRのM中間体の崩壊は遅い(時定数0,65s^<-1>,pH7.0)が100mMアジドの添加で約300倍に加速された.また,崩壊の速度定数の温度依存性から,速度の加速は活性化エネルギーおよび活性化エントロピーの減少によることが分かった.
3.上記のように,M中間体の崩壊は遅い.M中間体は発色団レチナールのシッフ塩基に脱プロトン化している.ここにプロトンを与えるアミノ酸残基がないので,M中間体の崩壊が遅いと推測し,このようなアミノ酸残基をもつ変異タンパクを作製した.この変異タンパクは確かにM中間の崩壊は1000倍近く速くなった.従って,上記の推測が正しいと結論した.
4.バクテリアのロドプシン類は4種類に分類できる.ppRおよびその類似色素は約500nmに吸収を持つが,その他の3種類の吸収極大は560から580nmの長波長にシフトしている.この原因を探るため,種々の変異タンパクを作製したが,現在までのところppRの吸収極大が他の3種より短波長にある理由は不明である.
5.結晶構造の分かっているバクテリオロドプシンを鋳型にして,分子動力学によりppRの構造を推定した.
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