| 研究課題/領域番号 |
10556065
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 展開研究 |
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| 研究分野 |
応用動物科学
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| 研究機関 | 岡山大学 |
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研究代表者 |
舟橋 弘晃 岡山大学, 大学院・自然科学研究科, 助教授 (50284089)
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| 研究分担者 |
青柳 敬人 JA全農, 飼料畜産中央研究所ETセンター, 所長(研究職)
丹羽 晧二 岡山大学, 農学部, 教授 (40089115)
岡部 勝 大阪大学, 遺伝子情報実験施設, 教授 (30089875)
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| 研究期間 (年度) |
1998 – 2001
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| 研究課題ステータス |
完了 (2001年度)
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| 配分額 *注記 |
12,300千円 (直接経費: 12,300千円)
2001年度: 900千円 (直接経費: 900千円)
2000年度: 1,700千円 (直接経費: 1,700千円)
1999年度: 3,000千円 (直接経費: 3,000千円)
1998年度: 6,700千円 (直接経費: 6,700千円)
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| キーワード | 牛 / 形質転換動物 / 緑色蛍光蛋白質 / 核移植 / 初期発生 / 体外受精 / 豚 / 多精子受精 |
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| 研究概要 |
先ず、緑色蛍光蛋白質(GFPまたはEGFP)遺伝子および他の目的遺伝子としてネオマイシン耐性遺伝子を含む遺伝子断片を授精後様々な時間に牛体外受精卵の前核に注入し、注入時期による外来遺伝子の発現およびその後の初期発生を調べたところ、注入の時期に関わらず牛胚では注入遺伝子がモザイクに発現する頻度の高いこと、また前核可視化のための遠心分離が授精後20時間以降の受精卵の初期発生を著しく阻害することが明らかになった。次に、EGFP遺伝子を前核注入後、EGFPを発現している(体外受精卵由来)牛桑実期胚割球を(染色体を除いた)体外成熟卵子に核移植したところ、胚盤胞期胚を得ることができたが、中にはEGFPが発現していない胚も存在し、桑実期胚の段階でさえゲノムに組み込まれずに発現している遺伝子が存在することが明らかになった。しかし、EGFPを発現している胚では、すべての細胞でEGFPが発現しており、これらの細胞を継代培養したところ、すべての細胞でEGFPと同時に組み込んだネオマイシン耐性遺伝子の発現も確認できた。以上の研究から、緑色蛍光蛋白質遺伝子をマーカーとして利用し、かつ核移植技術を巧みに組み合わせることによって、目的遺伝子をすべての細胞で発現するトランスジェニック動物(細胞)を生産するシステムを構築することができた。
また、豚の体外受精系を用いて、遺伝子を導入する材料である正常な前核期受精卵を体外で効率的に作製するための基礎研究にも取り組んだ。豚精子の授精能獲得および先体反応を促進する試薬に注目し、従来のカフェインを含む体外受精系では、先体反応初期まで誘起されることが多精子受精を引き起こす要因の一つであることを示唆し、アデノシンや受精促進ペプチドのような受精能獲得を促進し、自発的先体反応を阻止する試薬の存在が単精子侵入頻度を増すことを明らかにした。
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