| 研究課題/領域番号 |
10557069
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 展開研究 |
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| 研究分野 |
循環器内科学
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| 研究機関 | 大阪大学 |
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研究代表者 |
多田 道彦 大阪大学, 医学系研究科, 教授 (90093434)
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| 研究分担者 |
大津 欣也 大阪大学, 医学系研究科, 助手 (20294051)
西田 昌司 (西田 昌史) 大阪大学, 医学系研究科, 助手 (40283783)
葛谷 恒彦 大阪大学, 医学系研究科, 助教授 (80150340)
豊福 利彦 大阪大学, 医学系研究科, 助手
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| 研究期間 (年度) |
1998 – 1999
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| 研究課題ステータス |
完了 (1999年度)
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| 配分額 *注記 |
13,500千円 (直接経費: 13,500千円)
1999年度: 3,500千円 (直接経費: 3,500千円)
1998年度: 10,000千円 (直接経費: 10,000千円)
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| キーワード | Gap Junctional Protein / Connexin / 心筋細胞 / カラーイメージィングシステム / ランプ法 / ZO-1 / Gap junctional Protein / パッチクランプ法 / gap junctional protein / connexin-43 / 部位特異的変異導入法 / パッチ・クランプシステム |
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| 研究概要 |
Gap junctional Protein(GJP)は心筋細胞間の細胞膜に存在し細胞間に架橋を形成し、細胞間の物質及びイオン伝達に重要な役割を持つ。このGJPを介する細胞間相互作用は心筋や平滑筋のような電気的興奮性細胞ではその電気的同期性を決定する。GJPは細胞膜に存在し、6個のサブユニットより形成され隣接する細胞膜に存在するGJPに結合し細胞間の連絡孔を構成している。Connexinの基本構造は同一で、細胞膜を四回通過することにより、細胞膜外、細胞膜内、及び細胞質内のドメインを構成する。この細胞外のドメイン同士が接着することにより細胞間の連絡孔を形成する。Connexinの蛋白構造と機能解析にはDNAの部位特異的変異導入法を用いてConnexinの変異蛋白を作製し、これを細胞株に安定発現させる。このようにして得られた細胞株を使って細胞間の物質及びイオン伝達におけるGJPの役割を解析する。心筋細胞間のカルシウム伝達はカラーイメージィングシステムを使用することにより、カルシウムとそれ以外の蛍光発色物質でラベルした分子の移動を30ミリ秒単位で三次元表示することにより解析した。電気的同期性はパッチクランプ法を併用することにより、定量的解析を行った。細胞膜外ドメインに存在するcysteine残基が細胞間の連絡孔を形成する際の細胞膜外ドメイン同士の接着に重要であることを明らかにした。さらに、細胞膜内ドメインがZO-1に結合することによりconnexin-43の細胞膜への移送に関与することを報告した。
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