新規アポトーシス誘導因子を応用した悪性腫瘍に対する治療法の開発

• 研究課題/領域番号: 10557093
• 研究種目: 基盤研究(B)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 展開研究
• 研究分野: 血液内科学
• 研究機関: (財)癌研究会 (2000); 自治医科大学 (1998-1999)
• 研究代表者: 畠 清彦 (財)癌研究会, 癌化学療法センター・臨床部, 副部長 (80192699)
• 研究分担者: 山田 宗夫 森永乳業, 生物科学研究所, 主任研究員 ; 冨塚 浩 (富塚 浩) 自治医科大学, 医学部, 講師 (00285785) ; 照井 康仁 自治医科大学, 医学部, 講師 (10285786) ; 大月 哲也 自治医科大学, 医学部, 講師 (60275691)
• 研究期間 (年度): 1998 – 2000
• 研究課題ステータス: 完了 (2000年度)
• 配分額: 13,000千円 (直接経費: 13,000千円); 2000年度: 3,600千円 (直接経費: 3,600千円); 1999年度: 4,100千円 (直接経費: 4,100千円); 1998年度: 5,300千円 (直接経費: 5,300千円)
• キーワード: 細胞死 / 内皮細胞由来インターロイキン8 / アミノペプチダーゼ / 腫瘍細胞除去 / アポトーシス / 内皮細胞 / インターロイキン8 / 白血病 / 抗腫瘍効果

研究概要

白血病株細胞HL-60のPMA刺激下の培養上清20Lから、各クロマトグラフィーを用いて3種類の新規アポトーシス誘導因子を精製した。その中で、内皮細胞由来インターロイキン8は、単球由来インターロイキン8に活性がないことから、N末端の5ペプチドのみでもアポトーシス活性があることがわかった。マウスに担癌として白血病細胞移植ヌードマウスでも、細胞死を誘導し、抗腫瘍活性が認められた。悪性リンパ腫由来細胞株でも同様に活性を認めた。これはぺプチドでも同様に活性が認められた。またこの系の細胞死誘導系における耐性機序を検討したところ、N末端のペプチドを切断する酵素のひとつである、アミノペプチダーゼN(CD13)が、重要である事を示した。すなわち急性前骨髄球性白血病株細胞NB4では完全に耐性であった。CD13遺伝子を導入した白血病株細胞は、内皮細胞由来インターロイキン8による細胞死の誘導は耐性となった。またこの酵素の阻害剤であるubenimexを添加すると、この耐性は克服できる事が示された。次に精製した蛋白として、b2-ミクログロブリンがある。2〜5ng/ml以上で、細胞死を誘導し、HLA分子との相互作用とは別の経路の細胞死があることを証明した。さらに3番目の蛋白として、補体ファクターBbフラグメントがある。これはCD11cという補体に対する受容体のひとつを介して細胞死となる経路を見い出した。白血病細胞の細胞死に少なくとも、Fas,TNF系以外に経路がある事を示した。現在ex vivo purgingとして、体外での腫瘍細胞除去への応用に向けて、基礎的検討を加えている。

研究成果

• [文献書誌] Yuji Mishima: "CD13/aminopeptidase-N is resistance mechanism for endothelial Interleukin-8 inducing apoptosis"ICCSA supplement. (2001)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Mori M,: "CAM.-cytarabine, aclarubicin plus macrophage colony-stimulating factor in the treatment of acute myelogenous leukaemia with trilineage dysplasia : Usefulness of in vitro apoptosis in leukaemic cells"Leukemia and Lymphoma.. (2001)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Uwai M,: "A new apoptotic pathway for the complement factor B-derived fragment"Bb.J Cell Physiol.. 185(2). 280-292 (2000)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Shimura M,: "Oxidative stress as a necessary factor in room temperature-induced apoptosis of HL-60 cells."J Leukoc Biol.. 68(1). 87-96 (2000)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Yamada M,: "Effect of cytokines on the proliferation/differentiation of stroma-initiating cells."J Cell Physiol. 184(3). 351-355 (2000)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Yana L,: "Improved gene transfer to neuroblastoma cells by a monoclonal antibody targeting RET, a receptor tyrosine kinase."Hum Gene Ther.. 11(7). 995-1004 (2000)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Yuji Mishima, Yasuhito Terui, Hiroshi Tomizuka, Masaki Mori, Masaya Uwai, Masuzu Ueda, Miyuki Tanaka, Muneo Yamada, Hirotoshi Hayasawa, Keiya Ozawa, Noboru Horikoshi, and Kiyohiko Hatake: "CD13/aminopeptidase-N is a resistance mechanism for endothelial Interleukin-8 inducing apoptosis"ICCS supplement. (in press). (2001)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Mori M, Hatake K, Ozawa K.: "CAM.-cytarabine, aclarubicin plus macrophage colonystimulating factor in the treatment of acute myelogenous leukaemia with trilineage dysplasia : Usefulness of in vitro apoptosis in leukaemic cells."Leukemia and Lymphoma.. (in press). (2001)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Masaki Mori, Yasuhito Terui, Miyuki Tanaka, Hiroshi Tomizuka, Yuji Mishima, Masayuki Ikeda, Tadashi Kasahara, Masaya Uwai, Masuzu Ueda, Rie Inoue, Takehito Itoh, Muneo Yamada, Hirotoshi Hayasawa, Yusuke Furukawa, Yukihito Ishizaka, Keiya Ozawa, and Kiyohiko Hatake: "Anti-Tumor Effect of β2-Microglobulin in Leukemic Cells-Bearing Mice via Apoptosis-Inducing Activity : Activation of Caspase-3 and NF-κB^1."Cancer Res. (in press). (2001)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Uwai M, Terui Y, Mishima Y, Tomizuka H, Ikeda M, Itoh T, Mori M, Ueda M, Inoue R, Yamada M, Hayasawa H, Horiuchi T, Niho Y, Matsumoto M, Ishizaka Y, Ikeda K, Ozawa K, Hatake K.: "A new apoptotic pathway for the complement factor B-derived fragment Bb."J Cell Physiol.. 185(2). 280-92 (2000)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Shimura M, Osawa Y, Yuo A, Hatake K, Takaku F, Ishizaka Y.: "Oxidative stress as a necessary factor in room temperature-induced apoptosis of HL-60 cells."J Leukoc Biol.. 68(1). 87-96 (2000)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Yamada M, Suzu S, Tanaka-Douzono M, Wakimoto N, Hatake K, Hayasawa H, Motoyoshi K.: "Effect of cytokines on the proliferation/differentiation of stroma-initiating cells."J Cell Physiol.. 184(3). 351-5 (2000)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Muroi K, Suzuki T, Amemiya Y, Yoshida M, Kawano C, Kuribara R, Otsuki T, Izumi T, Tomizuka H, Komatsu N, Imagawa S, Hatake K, Miura Y, Ozawa K.: "Autologous peripheral blood stem cell transplantation for adults with B-lineage acute lymphoblastic leukemia : a pilot study."Leuk Lymphoma.. 38(1-2). 103-11 (2000)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Yano L, Shimura M, Taniguchi M, Hayashi Y, Suzuki T, Hatake K, Takaku F, Ishizaka Y.: "Improved gene transfer to neuroblastoma cells by a monoclonal antibody targeting RET, a receptor tyrosine kinase."Hum Gene Ther.. 1 ; 11(7). 995-1004 (2000)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Kaji Y, Ikeda K, Ikeda T, Kawakami K, Sasaki K, Shindo M, Hatake K, Harada M, Motoyoshi K, Mori S, Norimatsu H, Takahara J.: "IL-4, but not vitamin D(3), induces monoblastic cell line UG3 to differentiate into multinucleated giant cells on osteoclast lineage."J Cell Physiol.. 182(2). 214-21 (2000)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Terui Y, Tomizuka H, Mishima Y, Ikeda M, Kasahara T, Uwai M, Mori M, Itoh T, Tanaka M, Yamada M, Shimamura S, Ishizaka Y, Ozawa K, Hatake K.: "NH2-terminal pentapeptide of endothelial interleukin 8 is responsible for the induction of apoptosis in leukemic cells and has an antitumor effect in vivo."Cancer Res.. 15 ; 59(22). 5651-5 (1999)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Mori M, Terui Y, Ikeda M, Tomizuka H, Uwai M, Kasahara T, Kubota N, Itoh T, Mishima Y, Douzono-Tanaka M, Yamada M, Shimamura S, Kikuchi J, Furukawa Y, Ishizaka Y, Ikeda K, Mano H, Ozawa K, Hatake K.: "Beta (2) -microglobulin identified as an apoptosis-inducing factor and its characterization."Blood.. 15 ; 94(8). 2744-53 (1999)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Shimura M, Zhou Y, Asada Y, Yoshikawa T, Hatake K, Takaku F, Ishizaka Y.: "Inhibition of Vpr-induced cell cycle abnormality by quercetin : a novel strategy for searching compounds targeting Vpr."Biochem Biophys Res Commun.. 2 ; 261(2). 308-16 (1999)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Shimura M, Onozuka Y, Yamaguchi T, Hatake K, Takaku F, Ishizaka Y.: "Micronuclei formation with chromosome breaks and gene amplification caused by Vpr, an accessory gene of human immunodeficiency virus."Cancer Res.. 15 ; 59(10). 2259-64 (1999)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Shimura M, Tanaka Y, Nakamura S, Minemoto Y, Yamashita K, Hatake K, Takaku F, Ishizaka Y.: "Micronuclei formation and aneuploidy induced by Vpr, an accessory gene of human immunodeficiency virus type 1."FASEB J.. 13(6). 621-37 (1999)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Tanaka-Douzono M, Suzu S, Yamada M, Misawa E, Wakimoto N, Shimamura S, Hatake K, Motoyoshi K.: "In vivo stimulatory effect of macrophage colony-stimulating factor on the number of stroma-initiating cells."J Cell Physiol.. 178(2). 267-73 (1999)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Ikeda T, Ikeda K, Sasaki K, Kawakami K, Hatake K, Kaji Y, Norimatsu H, Harada M, Takahara J.: "IL-13 as well as IL-4 induces monocytes/macrophages and a monoblastic cell line (UG3) to differentiate into multinucleated giant cells in the presence of M-CSF."Biochem Biophys Res Commun.. 18 ; 253(2). 265-72 (1998)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Tomizuka H, Hatake K, Ikeda M, Gunji Y, Ikeda K, Takizawa T, Saito T, Hoshino Y, Ohtsuki T, Takahashi H, Yonehara S, Miura Y.: "CD95 predicts responsiveness to tretinoin in acute promyelocytic leukemia."Int J Mol Med.. 1(1). 207-11 (1998)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Hatake K, Tomizuka H, Ikeda M, Terui Y, Miura Y.: "Apoptosis-gene expression in hematopoietic system : normal and pathological conditions (Review)."Int J Mol Med.. 1(1). 121-9 (1998)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Terui Y, Ikeda M, Tomizuka H, Kasahara T, Ohtsuki T, Uwai M, Mori M, Itoh T, Tanaka M, Yamada M, Shimamura S, Ishizaka Y, Ikeda K, Ozawa K, Miura Y, Hatake K.: "Activated endothelial cells induce apoptosis in leukemic cells by endothelial interleukin-8."Blood.. 15 ; 92(8). 2672-80 (1998)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Nakamura M, Kudo T, Narimatsu H, Furukawa Y, Kikuchi J, Asakura S, Yang W, Iwase S, Hatake K, Miura Y.: "Single glycosyltransferase, core 2 betal-->6-Nacetylglucosaminyltransferase, regulates cell surface sialyl-Lex expression level in human pre-B lymphocytic leukemia cell line KM3 treated with phorbolester."J Biol Chem.. 9 ; 273(41). 26779-89 (1998)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Yuji Mishima: "CD13/aminopeptidase-N is resistance mechanism for endothelial Interleukin-8 inducing apoptosis"ICCSA supplement. (2001)
• [文献書誌] Mori M,: "CAM.-cytarabine, aclarubicin plus macrophage colony-stimulating factor in the treatment of acute myelogenous leukaemia with trilineage dysplasia : Usefulness of in vitro apoptosis in leukaemic cells"Leukemia and Lymphoma.. (2001)
• [文献書誌] Uwai M,: "A new apoptotic pathway for the complement factor B-derived fragment"Bb.J Cell Physiol.. 185(2). 280-292 (2000)
• [文献書誌] Shimura M,: "Oxidative stress as a necessary factor in room temperature-induced apoptosis of HL-60 cells."J Leukoc Biol.. 68(1). 87-96 (2000)
• [文献書誌] Yamada M,: "Effect of cytokines on the proliferation/differentiation of stroma-initiating cells."J Cell Physiol. 184(3). 351-355 (2000)
• [文献書誌] Yano L,: "Improved gene transfer to neuroblastoma cells by a monoclonal antibody targeting RET, a receptor tyrosine kinase."Hum Gene Ther.. 11(7). 995-1004 (2000)
• [文献書誌] Terui Y, Ikeda M, Tomizuka H, Hatake K, et al.: "Activated endothelial cells induces apoptosis in leukemic cells by endothelial interleukin-8"Blood. 92. 2672-2680 (1999)
• [文献書誌] Mori M, Terui Y, Ikeda M, Tomizuka H, Hatake K, et al.: "β2-Microglobulin Identified as an Apoptosis Inducing Factor and its Characterization"Blood. 94. 2744-2753 (1999)
• [文献書誌] Shimura M, Tanaka Y, Hatake K, et al.: "Micronuclei formation and aneuploidy induced by Vpr, an accessory gene of human immunodeficiency virus type 1"FASEB J. 13. 621-637 (1999)
• [文献書誌] Shimura M, Onozaki Y, Hatake K, Takaku F, et al.: "Micronuclei formation with chromosome breaks and gene amplification caused by Vpr, an accessory gene of human immunodeficiency virus"Cancer Res. 59. 2259-2264 (1999)
• [文献書誌] Tanaka-Douzono M, Suzu S, Hatake K, Motoyoshi K, et al.: "In vivo stimulatory effect of macrophage colony-stimulating factor on the number ofstroma-initiating cells"J. Cell Physiol. 178. 267-273 (1999)
• [文献書誌] Terui Y, Tomizuka H, Ozawa K, Hatake K, et al.: "N-terminal pentapeptide of endothelial interleukin 8 is responsible for the induction of apoptosis on leukemic cells and has anti-tumor effect in vivo"Cancer Res. 59. 5651-5655 (1999)
• [文献書誌] Tomizuka H,Hatake K,et al.: "CD95 predicts responsiveness to tretinoin in acute promyelocytic leukemia." Int J Mol Med. 1. 207-211 (1998)
• [文献書誌] Terui Y,Furukawa Y,Hatake K,Kitagawa S,Miura Y.: "Bcl-X is a Regulatory Factor of Apoptosis and Differentiation in Megakaryocytic Lineage Cells." Exp Hematol. 26. 236-244 (1998)
• [文献書誌] Terui Y,Ikeda M,Tomizuka H,Uwai M,Hatake K,et al.: "dentification of a novel apoptosis-inducing factor derived from leukemic cells: Endothelial interleukin-8,but not monocyte-derived, induces apoptosis in leukemic cells." Biochem Biophy Res Comm. 243. 407-411 (1998)
• [文献書誌] Terui Y,Ikeda M,Tomizuka H,Ozawa K,Hatake K,et al.: "Activated endothelial cells induces apoptosis in leukemic cells by endothelial interleukin-8." Blood. 92. 2672-2680 (1998)
• [文献書誌] Yamashita Y,Watanabe S,Hatake K,Ozawa K,et al.: "Tec and Jak2 kinases cooperate to mediate cytokine-driven activation of c-fos transcription." Blood. 91. 1496-1507 (1998)
• [文献書誌] Suzu S,Hatake K,Ota J,et al.: "Identification of alternatively spliced transcripts encoding murine macrophage colony-stimulating factor." Biochem Biophys Res Comm. 245. 120-126 (1998)
• [文献書誌] Ikeda T,Ikeda K,Sasaki K,Hatake K,Kaji Y,et al.: "IL-13 as well as IL-4 induces monocytes/macrophages and a monoblastic cell line(UG3) to differentiate into multinucleated giant cells in the presence of M-CSF." Biochem Biophys Res Comm. (in press). (1998)
• [文献書誌] Tanaka-Douzono M,Suzu S,Hatake K,Motoyoshi K,et al.: "The in vivo stimulatory effect of macrophage colony-stimulating factor on the number of stroma-initiating cells." J Cell Physiol. (in press). (1998)
• [文献書誌] Nakamura M,Kudo T,Hatake K,et al.: "Single glycosyltransferase,core 2 b1-6-N-acetylglucosamiyltransferase,regulates cell surface sialyl-Lex expression level in human pre-B lymphocytic leukemia cell line KM3 treated with phorbolester." J Biol Chem. 273. 26779-26789 (1998)
• [文献書誌] Shimura M,Tanaka Y,Hatake K,Takaku F,et al.: "Micronuclei formation and aneuploidy induced by Vpr,an accessory gene of human immunodeficiency virus type 1." FASEB J. (in press). (1999)
• [文献書誌] Igarashi,Hatake K,et al.: "High Serum level of macrophage colony-stumlating factor and granulocytic colony-stimulating factor in Kawasaki disease." Brit J Haematol. (in press). (1999)