| 研究課題/領域番号 |
10557248
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 展開研究 |
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| 研究分野 |
病態検査学
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| 研究機関 | 東京医科歯科大学 |
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研究代表者 |
寺岡 弘文 東京医科歯科大学, 難治疾患研究所, 教授 (30019137)
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| 研究分担者 |
斉藤 佳子 東京医科歯科大学, 難治疾患研究所, 教務職員 (50178969)
矢野倉 美恵子 東京医科歯科大学, 難治疾患研究所, 教務職員 (50143615)
高瀬 浩造 東京医科歯科大学, 医学部, 教授 (90211333)
山本 興太郎 東京医科歯科大学, 難治疾患研究所, 教授 (40000971)
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| 研究期間 (年度) |
1998 – 1999
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| 研究課題ステータス |
完了 (1999年度)
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| 配分額 *注記 |
13,000千円 (直接経費: 13,000千円)
1999年度: 2,000千円 (直接経費: 2,000千円)
1998年度: 11,000千円 (直接経費: 11,000千円)
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| キーワード | フローサイトメトリー / DNA切断端 / 重症複合型免疫不全症 / 細胞周期 / ベーター線 / DNA2重鎖切断修復 / V(D)J組換え / アポトーシス |
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| 研究概要 |
本研究の目的は、外因的あるいは内因的な染色体切断を定量的に時系列測定できるようにすることにある。まず、経費で購入できたフローサイトメーター(Coulter社製EPICSXL System IIC)をアイソトープセンターに搬入し、[^3H]チミジンの細胞核内取り込みによるDNA切断端の誘導と細胞周期、apoptosisとの関連を追究した。DNA切断端は、FITC-dUTPを用いたTUNEL法によって蛍光標識した。前骨髄性白血病細胞HL-60やT細胞由来Molt-4では、7.4kBq/mlの[^3H]チミジンではS期の細胞の割合の増加と弱いながらapoptosisが観察されたが、細胞周期はほぼ回転していた。しかし、74と185kBq/mlでは、S期の細胞の一過性の上昇と引き続くG2/M期停止さらにapoptosisへの移行が見られ、S期からG2/M期の細胞には対照に比べて数倍高いFITCシグナルが得られた。さらに、過酸化水素耐性HL-60細胞の解析から、H_2O_2などの活性酸素種の関与も明らかとなった。ネオカルチノスタチン(NCS)に対しても、2重鎖切断修復に必要なDNA-PKを欠くM059J細胞の方が正常なM059Kに比べて高感受性を示した。NCS50ng/ml添加後、フローサイトメトリーによってDNAヒストグラムパターンの経時変化をみたところ、M059J細胞では添加後30分でS期の細胞が増加し,この傾向は48時間まで続いた。他方、M059K細胞ではDNAヒストグラムパターンに大きな変化は認められなかった。断端数をフローサイトメトリーにて半定量化したところ、M059J細胞では細胞周期全般で切断端数の増加傾向が認められたが、M059K細胞では特にG1期の細胞でNCS添加後2時間を頂点にして切断端数は減少していった。このように、DNA切断端をフローサイトメトリーにてほぼ定量化することが可能となった。これら結果は、臨床面においても、放射線や抗癌剤による治療の効果や副作用の予測において、十分に利用可能と考えられる。
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