| 研究課題/領域番号 |
10660045
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
植物保護
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| 研究機関 | 三重大学 |
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研究代表者 |
三浦 健 三重大学, 医学部, 講師 (60219582)
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| 研究分担者 |
鎮西 康雄 三重大学, 医学部, 教授 (60024709)
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| 研究期間 (年度) |
1998 – 1999
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| 研究課題ステータス |
完了 (1999年度)
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| 配分額 *注記 |
2,800千円 (直接経費: 2,800千円)
1999年度: 1,300千円 (直接経費: 1,300千円)
1998年度: 1,500千円 (直接経費: 1,500千円)
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| キーワード | 幼若ホルモン / エクダイソン / 核内レセプター / 蚊 / 転写因子 / コアクティベータ / コアクティベーター |
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| 研究概要 |
本研究では、幼若ホルモン(JH)依存性転写因子の同定へのステップとしてエクダイソン(20E)依存性転写の分子機構を探るべく、蚊を材料として種々の転写関連因子のクローニングを試み、一部の因子の関してはその機能解析を行い、以下の結果を得た。
1.Bx42、GCN5、TBP、CBP、MBF1ホモログのクローニングを行い、前3者に関しては完全長のクローニングと配列の解析を行った。
2.哺乳類培養細胞とショウジョウバエ培養細胞を用いて、20E応答配列を持つluciferaseレポーターコンストラクトをtransfectionし、20Eあるいはそのanalogを培地に加えることにより、レポーター活性が上昇する系を作製した。
3.2.の実験系を用いて、Bx42については哺乳類細胞とショウジョウバエ細胞の両方の系で、GCN5に関しては哺乳類細胞の系での20Eシグナリングに対するコアクティベーション効果を検討し、程度は強くないものの、両者とも20E依存的な転写におけるcoactivatorとして作用することを示した。
4.Mammalian two-hybrid assayを用いて、Bx42、GCN5とecdysone receptorとのタンパク・タンパク相互作用を検討し、両者とも弱いながらも、EcRと相互作用することを確認した。
5.EGFPとのfusion protein発現コンストラクトを作製して哺乳類細胞にtransfectionすることにより、Bx42は核に局在化することを確認した。
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