| 研究課題/領域番号 |
10660253
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
畜産学・草地学
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| 研究機関 | 帯広畜産大学 |
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研究代表者 |
関川 三男 帯広畜産大学, 畜産学部, 助教授 (30120489)
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| 研究分担者 |
石下 真人 酪農学園大学, 酪農学部, 教授 (70221067)
三上 正幸 帯広畜産大学, 畜産学部, 教授 (40003107)
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| 研究期間 (年度) |
1998 – 1999
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| 研究課題ステータス |
完了 (1999年度)
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| 配分額 *注記 |
3,600千円 (直接経費: 3,600千円)
1999年度: 1,100千円 (直接経費: 1,100千円)
1998年度: 2,500千円 (直接経費: 2,500千円)
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| キーワード | ユビキチン / 骨格筋 / 心筋 / プロテアソーム / 細胞内タンパク質分解 / 熱成 / 2D-PAGE / 細胞内タンパク質分角 / 熟成 / 筋 |
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| 研究概要 |
(1)鶏浅胸筋における筋細胞内ユビキチンの局在を組織化学的に検討した。屠殺直後および熟成させた浅胸筋の凍結切片を抗ユビキチン血清で染色すると、屠殺後の経過時間に関わらず細胞質全体に陽性反応が認められた。なお、ユビキチンの染色性は、凍結に先だって試料を加熱処理すると向上することが判明した。これらの結果から、鶏骨格筋筋漿画分で電気泳動的に確認されたユビキチンは、筋細胞に本来的に存在すると結論した。
(2)牛心筋の細胞質にはユビキチンが存在し、屠殺7日日まで量的にほとんど変化しないことを電気泳動的に明らかにした。さらに、屠殺直後に認められたユビキチン陽性のバンドは貯蔵に伴い消失することを見出した。また、アクトミオシン画分にはユビキチンが存在しないことが確認された。
(3)サルの骨格筋(下肢部7筋、上腕部3筋)から筋漿を実験殺直後に調製しSDS-PAGEに供すると、全体的な泳動パターンは筋肉間および動物間(猿・牛・鶏・鹿・鯨・カンガルー・鴨・ワ二・狐)で類似していた。しかし、2次元電気泳動像ではサルの縫工筋および内転筋において、数個のスポットが欠失していた。また、豚では他の動物には認められない、約10kDa、等電点6-7のスポットが見出された。抗ユビキチン血清による免疫染色を行うと、8kDaのユビキチンに相当するバンドは、全ての筋試料で染色されたが染色強度は、それぞれ異なっていた。さらに抗ユビキチン血清に陽性なバンドは猿では大腿四頭筋(約40kDa)のみ陽性反応が認められた。
(4)牛大腿四頭筋筋漿のユビキチン化タンパク質の一次構造を分析した。アミノ酸6残基のみが決定されユビキチンの配列とは全く一致せず、このタンパク質はポリユビキチンではないことが明らかとなった。
(5)牛大腿四頭筋筋漿にプロテアソーム阻害剤を添加し培養するとユビキチン化タンパク質の蓄積が認められ、個体死に伴う筋細胞内タンパク質分解に、ユビキチン/プロテアソーム系が関与することが示唆された。
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