| 研究課題/領域番号 |
10670075
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
環境生理学(含体力医学・栄養生理学)
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| 研究機関 | (財)東京都医学研究機構 (1999)
(財)東京都神経科学総合研究所 (1998) |
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研究代表者 |
木村 信子 (財)東京都医学研究機構, 東京都神経科学総合研究所, 副参事研究員 (70100138)
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| 研究期間 (年度) |
1998 – 1999
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| 研究課題ステータス |
完了 (1999年度)
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| 配分額 *注記 |
1,800千円 (直接経費: 1,800千円)
1999年度: 800千円 (直接経費: 800千円)
1998年度: 1,000千円 (直接経費: 1,000千円)
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| キーワード | ソマトスタチン受容体 / 遺伝子発現 / 下垂体 / ホルモン / プロモーター解析 / 転写因子 / ソフトスタチン受容体 / 転写調節 |
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| 研究概要 |
ラット下垂体では、5種類のソマトスタチン受容体サブタイプ(sst1-5)遺伝子の中で、主に5型と2型が発現し、エストロゲンの慢性投与では2型が誘導され、5型は顕著に減少することを私達は報告してきた。本研究は、2型と5型遺伝子のプロモーター解析と、転写調節の解析から、両サブタイプの下垂体における機能や発現調節の生理的意義を明確にすることを目的として行われ次に示す結果を得た。1、5'隣接上流域をPCR法で2型は転写開始点から約4Kbp、5型は約3Kbpを単離した。2型、5型共に、5'側非翻訳部に約5Kbpのイントロンが存在していた。TATAboxやCCAATboxを持たず、Sp1、CREなどの結合モチーフが存在していた。2、5'上流配列のプロモーター解析から、両型共に転写開始点上流近位に強いプロモーター活性を、遠位に転写を負に調節するような配列の存在が推測された。3、ゲルシフト法により、2型、5型、プロモーター領域でトランスに働く転写因子群を明らかにした。更に、部位特異的変異法ほ用いて、プロモーター活性に必要とされるシスのエレメントを明確にした。GH_3細胞では2型遺伝子のSp1サイトにSp2、Sp3が、cAMP応答エレメントにATF-2、c-Junが結合し、5型遺伝子ではSp1サイトにSp2、Sp3の結合を認めた。4、両遺伝子の5'上流域には典型的なエストロゲン応答配列は認めなかったが、エストロゲンは5型の転写を負に調節した。Pit-1の共発現はエストロゲン作用に抑制的に作用した。2型遺伝子ではエストロゲンの正の調節はCREサイトを介して認められた。下垂体の発生分化に関わる転写因子Ptx1は、両遺伝子5'上流領域に作用し、転写活性を正に調節した。以上、ソマトスタチン受容体2型、5型遺伝子の転写に機能するシス配列とトランスに働く転写因子を明らかにし、下垂体特異的転写因子による転写活性の修飾を示唆した。また、エストロゲンは両型の遺伝子転写を修飾するが、その作用機序は両型で異なっていることが推測された。
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