| 研究課題/領域番号 |
10670125
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
医化学一般
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| 研究機関 | 京都府立医科大学 |
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研究代表者 |
信国 好俊 京都府立医科大学, 医学部, 講師 (80295641)
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| 研究分担者 |
竹田 潤二 (武田 潤二) 大阪大学, 医学部, 教授 (50163407)
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| 研究期間 (年度) |
1998 – 1999
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| 研究課題ステータス |
完了 (1999年度)
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| 配分額 *注記 |
1,100千円 (直接経費: 1,100千円)
1999年度: 1,100千円 (直接経費: 1,100千円)
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| キーワード | 遺伝子機能 / 遺伝子構造 / UBE2I / UBC9 / リボザイム / UBE21 |
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| 研究概要 |
目的:ユビキチン結合酵素UBC9(UBE21)は特異的転写因子MITF(Microphthalmia-associated Transcription Factor)と相互作用を有するMITFの異常はWaardenburg症候群II型を引き起こす。今回、リボザイムによるUBC9遺伝子の発現制御系とUBC9ゲノム遺伝子破壊法を用いたUBC9の機能解明を目指し以下の研究を行った。
結果:(1)リボザイムによるUBC9遺伝子の発現制御;マウスUBC9-mRNAに対する特異的ハンマーヘッド型リボザイムRZ-m329、RZ-m401、RZ-m620の発現プラスミドを構築した。in vitro transcription法でマウスUBC9-mRNAおよびリボザイムを作製し、これらのリボザイムがマウスUBC9-mRNAを切断することを確認した。次に、mUBC9とLucifcraseを結合したレポーターとリボザイム発現プラスミドを用いたレポーターアッセイで、培養細胞においてもRZ-m401が比較的効率よくマウスUBC9-mRNA発現を低下させることが確認できた。更に、MITFとGFP(Green Fluorescent Protein)の融合蛋白発現ベクターを構築した。現在、MITF-GFP発現ベクターとリボザイム発現ベクターの培養細胞への遺伝子導入実験にて、MITF機能に及ぼすUBC9作用を解析中である。(2)ヒトおよびマウスUBC9遺伝子の単離と構造解析;P1ファージライブラリーよヒトおよびマウスUBC9遺伝子を含むクローンhUBC9-P1、mUBC9-P1をクローニングした。ヒトUBC9遺伝子は、7つのエクソンから構成され、プロモーターはTATA-BoxがなくGC-richで、そのプロモーター活性は転写開始転から上流約1kbにより規定されることを明らかとした。また、マウスUBC9遺伝子も7つのエクソンから構成されることを確認した。
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