| 研究概要 |
アラキドン酸から12/15-リポキシゲナーゼによって合成されるヒドロペルオキシ酸がc-fosやc-junなどの転写調節因子の発現を誘導し,Mitogen-activated protein(MAP)キナーゼを活性化することによって,マクロファージや平滑筋細胞の増殖に関与している。臨床的にも動脈硬化症などの疾患にリポキシゲナーゼが関与していることが示唆されている。本研究では,動脈硬化症の初期病変に関与する低比重リポタンパク質(LDL)の酸化機構において,細胞内の12-リポキシゲナーゼが果たす役割を明らかにすることを目的として,遺伝子発現系を用いて解析した。伸張因子1-αの強力なプロモーターを有する発現ベクターpEF-BOSに,ネオマイシン耐性遺伝子を組み込んだ後,LDLに対する反応性が異なる白血球型および血小板型の12-リポキシゲナーゼcDNAを組み込んだ。この発現ベクターを,マウスマクロファージ様J774A.1細胞にリポフェクタミン法で導入して安定形質発現株を確立した。12-リポキシゲナーゼ発現細胞株のいずれの酵素型でもLDL内に酸化脂質の増加が認められ,その酸化脂質の分子種を高速液体クロマトグラフィーで解析するによって,酵素的にLDLの酸化がおこることが示された。さらに,この12-リポキシゲナーゼ発現細胞で産生された酸化LDLは,マクロファージのスカベンジャー受容体に認識されることが示された。これらの実験結果は,マクロファージに多量に存在する12-リポキシゲナーゼがLDLを酸化し,動脈硬化の発症に深く関与していることを示唆するものである。
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