新しい膜融合関連蛋白(R21蛋白)の機能および遺伝子解析

• 研究課題/領域番号: 10670416
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 内科学一般
• 研究機関: 九州大学
• 研究代表者: 中村 稔 九州大学, 医学部, 助手 (40217906)
• 研究分担者: 中野 修治 九州大学, 医学部, 講師 (40164248)
• 研究期間 (年度): 1998 – 1999
• 研究課題ステータス: 完了 (1999年度)
• 配分額: 3,600千円 (直接経費: 3,600千円); 1999年度: 1,300千円 (直接経費: 1,300千円); 1998年度: 2,300千円 (直接経費: 2,300千円)
• キーワード: 膜融合 / HTLV-1 / VSV-pseudotype / HTLV-1レセプター / reporter gene activation assay / CXCケモカイン / 膜 融合 / HTLV-1 レセプター

研究概要

HTLV-1レセプターのcell to cellの感染系として、cell fusion-dependent reporter gene activation assayを確立した。この系は、pCAGT7(T7RNA polymerase発現ベクター)とpCAGHTLV-1env(HTLV-1env発現ベクター)を共にトランスフェクションした293T細胞(donor cell)とpT7EMCLuc発現ベクター(T7RNA polymerase存在下でFire fly luciferase蛋白を発現するベクター)をトランスフェクションした細胞(recepient cell)をco-cultureすることにより、もしdonor cellとrecepient cellの間に細胞融合が生じるとluciferaseが活性化されることを利用したものである。このアッセイ系を用いて種々の細胞株との膜融合活性を調べたところ、MT-2やC91/PLなどのHTLV-1感染細胞やHuH-7,MDBKなどの細胞株を除いたほぼ全ての細胞株に膜融合活性が認められた。すなわち、HTLV-1のレセプターはリンパ系の細胞だけでなく上皮系の種々の細胞膜にも存在することが確認された。一方、cell freeの感染系としてVSV pseudotype(VSV-GF-HTLV-1env)を作製した。この系はVSV-GF-HTLV-1env(VSV-G蛋白の遺伝子のかわりにGFP蛋白遺伝子を有し、かつHTLV-1env蛋白を被ったVSVウイルス)が標的細胞に結合・侵入すると、感染細胞内でGFP蛋白を発現することから、その蛍光を蛍光顕微鏡下で観察することにより感染細胞、すなわちHTLV-1レセプターを発現した細胞を同定できる系である。この系を用いて、cell freeのHTLV-1ウイルスは感染効率がcell to cellの感染系に比して低いもののHepG2や293T細胞には効率よく感染することが明らかになった。また、標的細胞を種々のchemical modification(NaIO4,heparinase,heparitinase,phospholipase A2,phospholipaseCなどを用いて)を施した後の感染実験から、HTLV-1レセプターは蛋白ではなくglycosaminoglycanやphospholipidより構成されることが強く示唆された。現在、レセプターを高発現した細胞(HepG2)のcDNAライブラリー発現ベクターとレセプターを発現していない細胞株(HuH7)を用いてHTLV-1レセプター関連分子のexpression cloningを開始している。

研究成果

• [文献書誌] K. Okuma, M. Nakamura, S. Nakano and Y. Niho: "Identification of a novel bovine serum protein which is involved in HTLD-1-induced sfncytium formation."Arch. Virol.. 144. 1-18 (1999)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] K. Okuma, M. Nakamura, S. Nakano, Y. Niho and Y. Matsuura: "Host range of HTLD-1 analyzed by a cell fusion-dependent reporter gene activatim assay"Virology. 254. 235-244 (1999)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] K. Okuma, M. Nakamura, S. Nakano, Y. Yanagi and Y. Niho: "Molecular target for hematological malignancies and Cancer."Kyushu University Press (in press). (2000)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] B. Kitze, K. Usuku, Y. Yamano, S. Yashiki, M. Nakamura, T. Fujiyoshi, S. Izumo, M. Osame, and S. Sonoda.: "Huma CD4+ T lymphocytesrecognizea highly conserved epitope of human T lymphotropicvirus type 1(HTLV-I)env gp21 restricted by HLA DRB1 0101."Clin. Exp. Immunol.. 111. 278-285 (1998)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Shinji Shimoda, Judy Van de Water, Aftab Ansari, Minoru Nakamura, Hiromi Ishibashi, Ross L. Coppel, Jack Lake, EmmetB. Keeffe, Thomas E. Roche, and M. Eric Gershwin.: "Identificationand precursor frequency analysis of a common T cell epitope motif in mitochondrial autoantigensin primary biliary cirrhosis."J. Clin. Invest.. 102. 1831-1840 (1998)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Koichi Akashi, Tsunefumi Shibuya, Minoru Nakamura, Akiko Oogami, Mine Harada and Yoshiyuki Niho.: "Large granular lymphocyticleukemia with a mixed T-cell/Bcell phenotype."British J. Hematol. 100. 291-294 (1998)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] K. Okuma, M. Nakamura, S. Nakano, and Y. Niho.: "Identification of a novel bovine serum protein which is involved in human T-cellleukemiavirus type I(HTLV-I)-induced syncytium formation."Arch. Virol.. 144. 1-18 (1999)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] K. Okuma, M. Nakamura, S. Nakano, Y. Niho, and Y. Matsuura.: "Host range of human T-cellleukemiavirus type I analyzed by a cell fusion-dependentreporter gene activationassay."Virology. 254. 235-244 (1999)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Nobuyoshi Fukushima, Hedeyuki Ikematsu, Minoru Nakamura, Mieko Matsui, Shinji Shimoda, Kazuhiro Hayashida, Yoshiyuki Niho, and Hiromi Ishibashi.: "Serial nucleotide sequence analysis of anti-PDC-E2 antibodiesin primary biliary cirrhosis : evidence for antigen-driven clonal selection and the persistence of autoantibody-producing B cell clones."J. Autoimmunity.. (in press). (2000)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Shinji Shimoda, Minoru Nakamura, Hirohisa Shigematsu, Hironori Tanimoto, Toshihumi Gushima, and Hiromi Ishibashi.: "Mimicrypeptides of human PDC-E2 163-176 peptide the immunodominantT cell epitope of primary biliary cirrhosis."Hepatology. (in press). (2000)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Shinji Shimoda, Judy Van de Water, Yasunori Ichiki, Hirohisa Shigematsu, Minoru Nakamura, Aftab A. Ansari, Hiromi Ishibashi, and M. Eric Gershwin.: "The T cell immunobiology of primary biliary cirrhosis. Molecularand genetic approaches to diseases - Immunology, Hematology, and Oncology"edited by Yoshiyuki Niho, Kyushu University Press. 187-196 (1998)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Ishibashi, H., Shimoda, S., Shigematsu, H., Ichiki, Y., Nakamura, M., Hayashida, K., and Gershwin, E.M.: "Immune pathophysiology of primary biliary cirrhosis. Progress in Hepatology - Liver and Immunology"Volume5. edited by M. Yamanaka, G. Toda, and T. Tanaka Elsevier Science, Tokyo. (1999)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Ishibashi, H., Fukushima, H., Shimoda, S., Nakamura, M., Hayashida, K., Koike, K., and Niho, Y.: "Identification of the epitope of anti-PDC-E2 antibodies and analysis of their immunoglobulingenes. -mechanism of the production of antimitochondrialantibody"Autoantibodiesand Autoimmunity ISBN :. 25-32 (1999)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Kazu Okuma, Minoru Nakamura, Shuji Nakano, Yusuke Yanagi, and Yoshiyuki Niho.: "Analysis of viral entry and cell fusion mediated by Human T cell Leukemiavirus type I envelope glycoproteins. Moleculartarget for hematologicalmalignanciesand cancer."edited by Yoshiyuki Niho, Kyushu University Press.. 1-13 (2000)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] B.Kitze,K.Usuku,Y.Yamamoto.S.Yoshiki,M.Nakamura et al.: "Human CD4^+ T lymphocytes recognize a highly conserved epitope of human T lymphotropic virus type I(HTLV-1)env gp21 restricted by HLA DRB1^*0101"Clin. Exp. Immunol.. 111. 278-285 (1998)
• [文献書誌] Shinji Shinoda,Judy V.D.Water,Aftab Ansari,Minoru Nakamura et al.: "Identification and precursor frequency analysis of a common T cell epitope motif in mitochondrial autoantigens in primary biliary cirrhosis"J. Clin. Invest.. 102. 1831-1840 (1998)
• [文献書誌] K.Okuma,M.Nakamura et al.: "Identification of a novel bovine serum protein which is involved in HTLV-I-Induced syncytium formation."Arch. Virol.. 144. 1-18 (1999)
• [文献書誌] K.Okuma,M.Nakamura et al.: "Host range of human T-cell leukemia virus type I analyzed by a cell fusion-dependent reporter gene activation assay."Virology. 254. 235-244 (1999)
• [文献書誌] K.Okuma,M.Nakamura,S.Nakano,Y.Yanagi and Y.Niho: "Molecular Target for hematological malignancies and cancer : Analysis of Viral entry and cell fusion mediated by HTLP-1 envelope glycoproteins"Kyushu University Press (in press). (2000)
• [文献書誌] B.Kitae,K.Usuku,Y.Yamamoto,S.Yashiki,M.Nakamura,et al: "Human CD4^+ T lymphocytes recognize a highly conserved epitope of human T lymphotropic virus type I(HTLD-1)env gp21 restricted by HLADRB^*0101." Clin.Exp.Immunol.111. 278-285 (1998)
• [文献書誌] Shinji Shimoda,Judy V.D.Water,Aftab Ansari,Minoru Nakamura et al: "Identification and precursorfrequency analysis of a common T cell epitope motif in mitochondrial autoantigens in primary biliary cirrhosis." J.Clin.Invest.102. 1831-1840 (1998)
• [文献書誌] K.Okuma,M.Nakamura et al: "Identification of a novel borine serum protein which is involved in human T-cell leukemia virus typeI(HTLD-1)-indnced syncytium formation" Arch.Virol.144. 1-18 (1999)
• [文献書誌] K.Okuma,M.Nakamura et al: "Host range of human T-cell leukenla virus typeI analyzed by a cell fusion-dependent reporter gene activation assay" Virolgy. 254. 235-244 (1999)