| 研究概要 |
(目的)単純ヘルペス脳炎(HSVE)例および非HSVE例の経時的な髄液検体を用い化学発光法による髄液内HSV抗原定量,感度の異なる2種のPolymerase chain reaction(PCR)法による髄液内HSV-DNA定量をおこない、各群の感度,特異性,陽性予知率及び陰性予知率を経時的に算出し、その各値について3群間で有意差検定をおこない、これら三測定法のHSVEの診断における有用性の比較をおこなった。(対象/方法)HSVEII例,24髄液検体と非HSVE脳炎20例の29髄液検体を用い化学発光法,single PCR法およびnested PCR法で定量した。化学発光法は、髄液、ルミノール含有medium,血漿,および正常顆粒球浮遊液を37℃でincubateし,抗HSV抗体を加えたassay系を用い、髄液検体の化学発光量をluminescence readerで測定した。この値を、基準曲線から髄液中のHSV抗原量を定量した。single PCR法は、増幅DNAを234bpで検出した。PCR産物の信号強度をdensitometerで測定し、既知ウイスル量のregression curveから定量した。最小検出感度は50pfu/ml。nested PCR法は、Kimuraらの方法に従った。増幅DNAはagarose gelに330bpで検出した。Southern blotsにおけるPCR産物のradioactivityをimage analyzing systemで定量した。最小検出感度は20-50copies/mlである。(結果)化学発光法は,1検体(20病日)を除く第3〜25病日の全髄液検体にて50〜48.000pfu/ml相当の抗原量を検出し得た。single PCRでは6検体において50〜47.000pfu/mlのゲノム量を検出し得た。nested PCRでは11検体において100未満〜120.000copy/mlのゲノム量を検出し得た。HSVEの各測定法の感度は症例ベースで化学発光法100%,single PCR36%,nested PCR56%,検体ベースで化学発光法88%,single PCR25%、nested PCR52%であった。非HSVEはいずれも陰性であった。HSVEの発症第1病日〜第7病日の発症急性期において、化学発光法およびnested PCR法の感度は、100%であった。しかし、single PCR法では75%と低かった。第8病日以後第32病日までの発症急性期を過ぎた時期では、化学発光法は両PCR法より有意に検出感度が高かった。特異性および陽性予知率は、いずれの測定法も100%であった。しかし、陰性予知率は化学発光法はsingle PCR法よりも有意に高値を示した。(まとめ)化学発光法の感度は急性期において好感度(nested)PCR法と同等の性能を示し、急性期以後では好感度(nested)PCR法より感度は高かった。さら最小検出感度の異なるPCR法において本症の検出感度は大きく異なってた。以上より、現時点での本症の診断には、PCR法、化学発光法および血清診断(抗体診断)のcombinationが最も効果的な診断法と考えた。
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