| 研究課題/領域番号 |
10670634
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
循環器内科学
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| 研究機関 | 秋田大学 (1999)
東京医科歯科大学 (1998) |
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研究代表者 |
古川 哲史 秋田大学, 医学部, 助教授 (80251552)
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| 研究期間 (年度) |
1998 – 1999
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| 研究課題ステータス |
完了 (1999年度)
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| 配分額 *注記 |
3,700千円 (直接経費: 3,700千円)
1999年度: 1,300千円 (直接経費: 1,300千円)
1998年度: 2,400千円 (直接経費: 2,400千円)
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| キーワード | イオンチャネル / クロライド / ストレッチ / 酵母2ハイブリッド法 / 蛋白-蛋白相互作用 / 細胞周期 / cdc2キナーゼ / MAPキナーゼ / イオンチャンネル / 伸展刺激 / 細胞骨格 / アポトーシス / 圧負荷 |
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| 研究概要 |
心臓は常に収縮・拡張の物理力の影響下におかれており伸展刺激により活性化されるイオンチャネルの生理的意義は大きい。本研究計画では伸展刺激活性化チャネル周辺の情報伝達の分子機構を明らかにするため同チャネルに結合する分子を心臓cDNAライブラリーから酵母2ハイブリッド法を用いスクリーニングし蛋白-蛋白相互作用による機能調節を検討した。伸展刺激活性化クロライドチャネルであるCIC-2のカルボキシ末端には細胞周期に関連する蛋白が3種類結合した。In vitroりん酸化アッセイではCIC-2のカルボキシ末端が細胞分裂期(M期)の活性の上昇するp34cdc2/cyclineBおよびMAPキナーゼにより直接りん酸化をうけること、電気生理学的アッセイによりCIC-2チャネルがp34cdc2/cyclineBによるりん酸化により機能抑制をうけ、蛋白脱りん酸化酵素によりチャネル活性が上昇することが判明した。また卵母細胞の発現システムを用いた実験ではCIC-チャネル活性化により細胞容積が減少し、CIC-2チャネル抑制により細胞容積が増大することが判明した。半定量的逆転写PCR法を用いた実験ではCIC-2のメッセージは胎児期および肥大心で増加していた。以上の結果からCIC-2チャネルは細胞分裂における急激な細胞容積変化に重要な役割を演じるチャネルであり、サイクリン依存性キナーゼによる可逆的りん酸化・脱りん酸化によりチャネル活性が機能調節をうけること、転写レベルでも細胞周期のステージにより発現調節をうけることが示唆された。
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