| 研究課題/領域番号 |
10670944
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
血液内科学
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| 研究機関 | 三重大学 |
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研究代表者 |
小林 透 三重大学, 医学部・附属病院, 講師 (00144246)
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| 研究期間 (年度) |
1998 – 1999
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| 研究課題ステータス |
完了 (1999年度)
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| 配分額 *注記 |
3,000千円 (直接経費: 3,000千円)
1999年度: 1,100千円 (直接経費: 1,100千円)
1998年度: 1,900千円 (直接経費: 1,900千円)
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| キーワード | p53 phosphorylation / Bax / apoptosis / cytochrome c / caspase activation / radiation / cytosine arabinoside / BV173 / p53燐酸化 / 放射線照射 / doxorubicin / p53 / 燐酸化 / Bcl-2 / Fas / APO-1 / アポトーシス |
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| 研究概要 |
1.白血病細胞株BV173は野生型p53遺伝子を有し、放射線照射とcytosine arabinoside(ara-C)処理で、共にBax遺伝子発現は誘導されるが、Fas/APO-1遺伝子はara-C処理ではほとんど誘導されなかった。BaxとFas/APO-1の上流遺伝子であるp53蛋白の性状について等電点電気泳動とSDS-PAGEの2次元で検索したところ、放射線照射とara-C処理ではp53蛋白の等電点は異なり、phosphatase処理で共通の等電点にもどるためp53蛋白の燐酸化に相違があることが示された。p53燐酸化抗体を用いた検討ではserine 15,33,392は燐酸化され放射線照射・ara-C・doxorubicin処理で差異を認めなかった。
2.野生型Baxをもちproapoptotic Bax蛋白を発現している白血病細胞株K562にp53の下流遺伝子であるBax・コントロール・Bcl-2発現ベクターを一過性遺伝子導入しapoptosisを検索すると、Bax遺伝子導入で最もapoptosis細胞が多い。しかし、electroporation自体が細胞障害性を有するためTet-On systemによるBax発現系をK562細胞に安定導入しBax発現を誘導するとapoptosisが誘導され、この反応はpancaspase inhibitor(zVAD-fmk)により阻害されるため、cytochromecを介しないcaspase活性化経路が示唆された。
3.大腸癌細胞株DLD-1にTet-On systemによるBax発現系を安定導入した細胞のBax誘導によるapoptosis機構はcytochromecを介しており、胃癌細胞株KATOIIIのBax発現ベクター安定導入株の抗癌剤に対する感受性増強機構はmitochondriaからのcytochromec放出増強によることが示された。
以上よりp53蛋白は細胞障害性刺激に対して燐酸化を受け、下流で働くBax遺伝子によるapoptosis誘導機構は、cytochromecを介する経路とcytochromecを介さずcaspaseを活性化する経路が存在することが示された。
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