| 研究課題/領域番号 |
10671258
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
胸部外科学
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| 研究機関 | 大阪大学 |
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研究代表者 |
宮川 周士 大阪大学, 医学系研究科, 助教授 (90273648)
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| 研究分担者 |
岡部 勝 遺伝情報実験施設, 教授 (30089875)
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| 研究期間 (年度) |
1998 – 1999
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| 研究課題ステータス |
完了 (1999年度)
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| 配分額 *注記 |
3,100千円 (直接経費: 3,100千円)
1999年度: 1,000千円 (直接経費: 1,000千円)
1998年度: 2,100千円 (直接経費: 2,100千円)
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| キーワード | 細胞障害活性 / ブタ血管内皮 / HLA-G / NK細胞 / β2ミクログロブリン / β2ミクログロプリン |
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| 研究概要 |
HLA-Gが異種であるブタの血管内皮細胞に発現させ、ヒトNKcellを抑制することを、H10年度に報告した。引き続き、HLA-Eについて、同様な実験をおこなった。また、糖転移酵素により
1) ヒトHLA-EのcDNAをヒトじゅうもう細胞よりRT-PCR法によりクローニングした。これらを動物細胞発現ベクターpCAGGS(brta-actin promoter)に組み込んだ。HLA-Eはシグナルペプチドを他のHLAのものを利用して発現することがしられているいため、HLA-EのそれをHLA-Gで置き換えたもの(HLA-GE)も合成し、同じくpCAGGSに組み込んだ。
CHO細胞でのこれらの一過性の発現は、HLA-Eそのものでは殆ど発現をみないのに対して、HLA-GEでははっきりと発現した。
次に、このHLA-GEをブタ血管内皮細胞(MYP30)へlipid法により遺伝子導入し、安定形質発現細胞株を数クローン得ることに成功した。
これらのクローンは、ヒトのNK細胞による細胞傷害試験を行った結果、はっきりとNK細胞によるブタ血管内皮細胞の攻撃を抑制した。
2) 次に、糖転移酵素 α1,2FT、α2,3ST、α2,6 ST、GNT-lll。
これらの高発現のクローンを樹立する。これにヒトのNK細胞を反応させてA.のごとくさまざまな細胞障害活性を調べ、コントロールのブタの血管内皮に対する反応との差を検討する。
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