| 研究概要 |
研究実績の概要
血中PSA mRNAの測定が盛んに行われているが、いまだにその臨床的意義は不明である。その理由はRNAの抽出、RT-PCR,PCR産物の電気泳動と複雑な過程が必要であり、primerの設定をはじめ各施設により方法がまちまちであるためである。
我々はPSA mRNA測定の標準化をめざしてELlSA PSA mRNA検出系を作成した(Urology 53,228-235,1999)。さらに、血中PSA mRNA測定の標準化には測定の感度をあげることが必要な条件である。
primerの設定
PSA遺伝子は1466bpであり、4つのIntronと5つのExonで形成されている。1466bpのPSAcDNAを網羅するように8種類のprimerを設定した。
前立腺癌LNCaP、PC-3、DU145、腎癌5、膀胱癌2、精巣腫瘍2の合計12種類の培養細胞を用いてRT-PCRでPCR産物の有無を検討した。primer4のみが3種類の前立腺癌細胞のみに680bp(172-851)のPCR産物を認め、さらにSouthern blotで確認した。(lnt J ∪rol 6,526-531,1999)。また、Subcloningにて、この領域の遺伝子変異がほとんどないことを確認した(日泌尿会誌,90,220,1999)。
ELlSA PSA mRNAの検出感度をさらにあげるために、磁気ビーズを用いて血中より癌細胞を抽出する改良をおこなった(第59回日本癌学会総会記事p118,1999)。
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