| 研究課題/領域番号 |
10671490
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
泌尿器科学
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| 研究機関 | 奈良県立医科大学 |
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研究代表者 |
平尾 佳彦 (1999) 奈良県立医科大学, 医学部, 教授 (00133207)
仲川 嘉紀 (1998) 奈良県立医科大学, 医学部, 助手 (60281276)
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| 研究分担者 |
吉川 和宏 愛知医科大学, 医学部, 講師 (60109759)
植村 天受 (植村 大受) 奈良県立医科大学, 医学部, 講師 (90213397)
平尾 佳彦 奈良県立医科大学, 医学部, 教授 (00133207)
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| 研究期間 (年度) |
1998 – 1999
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| 研究課題ステータス |
完了 (1999年度)
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| 配分額 *注記 |
3,100千円 (直接経費: 3,100千円)
1999年度: 1,400千円 (直接経費: 1,400千円)
1998年度: 1,700千円 (直接経費: 1,700千円)
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| キーワード | 腎細胞癌 / MN / CA9 / 抗体 |
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| 研究概要 |
1.MN/CA9発現腎細胞癌培養細胞の作製
MN/CA9 cDNAを発現Vecter BCMGSNeoの組み込んだ後、電気パルス法によりマウス腎細胞癌培養細胞RenCa細胞に遺伝子導入を行なった。得られたクローンのMN/CA9発現はMHA(Mixed Hemadsorption)法により確認した。
2.MN/CA9発現マウス腎細胞癌モデルの作製
MN/CA9導入RenCa細胞を、近交系マウスBAL/Bcの皮下に注入し、腫瘍の増殖を認めると共に、摘出した腫瘍をG250抗体により免疫組織染色を行い、MN/CA9の発現を確認した。
3.大腸菌によるMN/CA9抗原の作製
MN/CA9抗原のアミノ酸配列において、他の抗原とhomologyの低い領域の遺伝子PCRにて増幅し、vecterに取り込んだ。大腸菌に導入し発現した蛋白が、目的の蛋白であることをSDS-PAGEおよびWestern blotにて確認した。
4.家兎によるポリクローナル抗体の作製
この作製した蛋白をアジュバントとともに家兎に免疫し、採取した血清中の抗体価をELISAにて測定した。抗体が産生されていることを確認した、現在血清をaffinity精製中である。
5.マウスによるモノクローナル抗体の作製
MN/CA9発現RenCa細胞cell lysateを免疫抗原とし、抗NM/CA9モノクローナル抗体産生ハイブリドーマを作製した。抗体の反応特異性は、従来報告されている抗体と同一であることが確認された。
6.single chain抗体の作製
ハイブリドーマより抗体遺伝子を分離し、single chain抗体作製のための遺伝子改変を行い、single shain抗体蛋白を大腸菌より得ている。現在、抗体の精製と活性の測定を行っており、抗体の臨床応用に向けた検討を予定している。
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