研究概要 |
ガラクトース結合性BPAレクチンを用い、糖鎖認識部位のみ(具体的には、糖鎖認識に関わっている一つのループ)にランダムな変異を導入し、糖結合特異性を改変することを試みた。この変異を導入した人工レクチンを「サイボーグレクチン」と名付け、λfooファージを用いたファージディスプレイという一種の発現クローニングの方法を用いることにした。λfooファージの発現ベクターを用い、ファージディスプレイの系でパニングを数回繰り返すことにより、マンノース、N-アセチルガラルトサミン、N-アセチルグルトサミン、フコースの4種類のそれぞれの糖に結合するファージクローンを回収した。実際に回収されたクローンを単離し、さらにそのファージからDNAを回収し塩基配列を決定することにより、導入した変異並びにそこから類推される改変レクチン糖結合ループのアミノ酸配列を決定した。マンノース結合活性を持ったクローン10個を拾ったところ、変異を導入した9アミノ酸から成るペプチドの配列は、3つのクローンでDSPNTSWE、2つのクローンはDSATNAEWG、他にDTIENGSWW,DGIPNSLWF,DGLNNDDWS,DDLENSDWGというアミノ酸配列であることが明らかになった。これらマンノース結合活性を持つレクチンの糖結合ループのアミノ酸配列に関して、何らかの規則性があるのか否かを検討した。ループ内に保存した3つのアミノ酸残基以外に着目しその規則性があるか否かを検討したところ、際だって保存されている配列(アミノ酸残基)は見当たらなかったが、ライブラリーの大きさなど、いくつかの今後検討すべき課題が明らかになった。
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