| 研究概要 |
本研究は,肝細胞内におけるCa^<2+>に関連した情報伝達系の制御蛋白質レギュカルチン(RC)遺伝子の転写制御機構を解明することを目的とした。RC-RNAは,肝臓に著明に発現しており,臓器特異性がみられる。まず,ラット肝がん細胞(HgIIE)を用いた実験において、RC-RNAの発現,肝細胞内へのCa^<2+>流入により増大され,その情報伝達に関連したプロテインキナーゼCやCa^<2+>/カルモデュリン依存性プロティンキナーゼ,さらにはプロティンチロシンキナーゼを介した蛋白質リン酸化により増進され,核内転写因子のリン酸化が重要であることを推察した。さらに,肝細胞核に存在する核蛋白質がRC遺伝子のプロモーター領域に結合し,転写活性を高めることを見出し,その核蛋白質のRC遺伝子への特異結合がCa^<2+>シグナリングを介して増進することを明らかにした。そこで,RC遺伝子プロモーター領域における転写因子結合性のコンセンサスシークシンスを解析し,転写因子NFI結合領域が存在することを見出した。肝細胞核蛋白質がNFI結合領域に結合してるのかつについて究明したところ,NFI結合領域に関連したTTGGC配列がその結合に関与することが見出された。さらに,RC遺伝子プロモーター領域のTTGGC配列に結合する核内蛋白質をワンハイブリッド法により検索し,NF-I(AII)と新規の転写因子が結合することを明らかにした。この新規の転写因子のcDNAはクリーニングに成功した。
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