| 研究課題/領域番号 |
10672077
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
生物系薬学
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| 研究機関 | 神戸学院大学 |
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研究代表者 |
岡本 博 神戸学院大学, 薬学部, 教授 (00028870)
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| 研究分担者 |
屋山 勝俊 神戸学院大学, 薬学部, 助手 (30248108)
鷹野 正興 神戸学院大学, 薬学部, 助手 (30258107)
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| 研究期間 (年度) |
1998 – 1999
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| 研究課題ステータス |
完了 (1999年度)
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| 配分額 *注記 |
3,400千円 (直接経費: 3,400千円)
1999年度: 1,200千円 (直接経費: 1,200千円)
1998年度: 2,200千円 (直接経費: 2,200千円)
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| キーワード | キニノーゲン / キニン / カリクレイン・キニン / ブラジキニン / カリクレイン・キニン系 / ノックアウトマウス |
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| 研究概要 |
申請者は、キニノーゲンを完全に欠損したマウスを用いてカリクレイン・キニン系の生理的役割を解明すべく、ジーンターゲティング法によるキニノーゲン遺伝子欠失マウスの作製を、以下のように進めてきている。
1.マウスキニノーゲン遺伝子の構造解析
マウスゲノムDNAをテンプレートとし、cDNA情報から設計したプライマーを用いて、LA-PCR法により各エクソン間のDNAを増幅した。この増幅産物をサブクローニングし配列を決定した。その結果、キニノーゲン遺伝子は全長約24kbで、11個のエクソンから構成され、第10エクソンにブラジキニン領域と、3'側に高分子キニノーゲン軽鎖に対応する構造が確認され、また第11エクソンに低分子キニノーゲンの軽鎖に対応する構造を認めた。
2.マウスブラジキニンターゲッティングベクターの構築
ターゲッテイング用ベクターとしてpPNTを用いた。マウスキニノーゲンゲノムDNAの第3エクソン下流のイントロンから、第10エクソンのブラジキニン配列上流までの約7.5kb(Long arm)、また第10エクソンから第11エクソン上流までの約2.4kb(Short arm)に対してプライマーを設計し、LA-PCR法によってこれら領域を増幅した。次に、このLong armとShort armが、Neomycin耐性遺伝子を挟むようにベクターに順次挿入した。その結果、ブラジキニン配列を含む144bpのDNAが欠失したマウスブラジキニンターゲッティングベクターを構築することができた。このベクターのマウスES細胞への導入、そのクローニング、ES細胞の胚細胞への導入とキメラマウス作製を現在行っている。
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