新しい腫瘍関連抗原TSP-1の遺伝子及び蛋白レベルでの発現解析

• 研究課題/領域番号: 10672194
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 病態検査学
• 研究機関: 福岡大学
• 研究代表者: 黒木 政秀 福岡大学, 医学部, 教授 (40122692)
• 研究期間 (年度): 1998 – 1999
• 研究課題ステータス: 完了 (1999年度)
• 配分額: 2,200千円 (直接経費: 2,200千円); 1999年度: 800千円 (直接経費: 800千円); 1998年度: 1,400千円 (直接経費: 1,400千円)
• キーワード: 腫瘍関連抗原 / 細胞外マトリックス / トロンボスポンジ-1 / TSP-1 / モノクローナル抗体 / サイトカイン / インターロイキン-10 / 腫瘍マーカー / トロンボスポンジン-1 / 血管新生抑制因子 / 細胞接着因子

研究概要

Thrombospondin-1(TSP-1)はもともと血小板α顆粒より産生される分子量約450kDaの糖蛋白として報告されたが,現在では繊維芽細胞,血管内皮細胞など種々の細胞での産生が知られている.最近TSP-1に対して数種のモノクローナル抗体が作製され組織免疫染色などに用いられているが,その特異性など不明な点が多い.そこで我々はまずTSP-1に対する新たなモノクローナル抗体の作製を試みた.TSP-1を精製したあとBALB/cマウスを免疫し,細胞融合によりハイブリドーマを作製した.最終的にIgM抗体6種,IgG1抗体4種,およびIgG3抗体3種が得られた.エピトープを解析した結果,いくつかの特異性の違うモノクローナル抗体が確認され,癌患者血清中のTSP-1レベルを測定できるものと癌の組織検索に有用であるものとを碓認した.
一方, TSP-1は細胞外マトリックス(ECM)に分類され,炎症や傷害部位では大量に放出されて多彩な接着部位を持つため多くの物質に結合する.またTSP-1はTGF-βの主な生体内活性化物質である.これらのことからTSP-1の免疫系に与える影響に興味が持たれる.そこで我々はTSP-1の抗原提示細胞(APC)およびAPCとT細胞の反応系に対する影響を,分泌されるサイトカインを指標にして調べた.その結果,可溶型のTSP-1はPHAで刺激された系でT細胞の増殖を抑制し,またAPCによるインターロイキン-10(I1-10)の産生を亢進させ,炎症反応や免疫反応の場において,反応の終息に重要な役割を担っていること世界で初めて証明した.
以上の結果は,TSP-1がある種の癌で腫瘍マーカーになる可能性を示唆するとともに,生体におけるTSP-1の機能の一つを証明するものである.

研究成果

• [文献書誌] 別府理智子, 荒川文子, 山本貴文, 黒木求, 山下裕一,: "Human thrombospondin-1に対するIgGモノクローナル抗体の作製"日本癌学会総会記事. 89. 617 (1998)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] 別府理智子, 中村研, 黒木求, 黒木政秀: "トロンボスポンジ-1のマクロファージ及びT細胞のサイトカイン産生に対する作用"日本免疫学会総会・学術集会記録. 29. 134 (1999)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Kuroki, Ma., Matsushita, H. ,Matsumoto, H., Hirose, Y., Senda, T. Ymamoto, T.: "Nonspecific cross-reacting antigen-50/90 (NCA-50/90)as a new tumor marker"Anticancer Res.. 19. 5599-5606 (1999)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Nakamura, K., Yuh, K., Sugyo, S., Kuroki, Ma., Shijo, H., Martsuoka, Y.: "Unresponsiveness of peripheral T cells induced by intrusion of apoptotic bodies derived from autologous T cells"Cell. Immunol.. 193. 147-154 (1999)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Miyajima-Uchida, H., Hayashi, H., Beppu, R., Kuroki, Mo., Arakawa, F., Kuroki, Ma.: "Production and accumulation of thrombospondin-1 in human retinal pigment epithelial cells"Invest. Ophthalmol. Vis. Sci.. 41. 561-567 (2000)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Beppu, R. Nkamura, K., Miyajima Kuroki, Mo., Yamashita, Y. and Kuroki, Ma.: "Soluble thrombospodin-1 suppresses T-cell prolifiration and enhances IL-10 secretion by antigen presenting cells in the presence of phytohemagglutinin"Cytokine. 12(印刷中). (2000)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] 山本貴文,荒川文子,中村研,黒木求,松本久伸,阿部裕典,黒木政秀: "腫瘍マーカー研究会誌, 第14巻(石井 勝,編)"腫瘍マーカー研究会(東京). 184 (1999)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Kuroki, Ma., Xu, Z., Senba, T. and Arakawa, F.: "Recent Research Developments in Immunology, Vol.1"Research Signpost (Korala). 120 (1999)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Beppu, R. Arakawa, F., Yamamoto, T., Tomita, Y., Kuroki, Mo., Yamashita, Y., Shiraikusa, T, and Kuroki, Ma.: "Generation of IgG monoclonal antibodies human thrombospondin-1 (TSP-1)"Jpn. J. Cancer Res.. 89(Suppl.). 617 (1998)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Beppu, R. Nakamura, K., Kuroki, Mo., and Kumki, Ma.: "The effect of thrombospondin-1 on the cytokine production by macrophages and T cells"Proc. Jpn. Soc. Immunol.. 29. 134 (1999)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Kuroki, Ma., Matsushita, H., Matsumoto, H., Hirose, Y., Senba, T. and Yamamaoto, T.: "Nonspecific cross-reaction antigen-50/90 (NCA-50/90) as a new tumor maker"Anticancer Res.. 19. 5599-5606 (1999)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Nakamura, K., Yuh, K., Sugyo, S., Kuroki. Ma., Shijo. H., Matsuoka, Y.: "Unresponsiveness of peripheral T cells induced by intrusion of apopototic bodies derived from autologous T cells"Cell. Immunol.. 193. 147-154 (1999)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Miyajima-Uchida, H., Hayashi, H., Beppu, R., Kuroki, Mo., Arakawa, F., Kuroki, Ma.: "Production and accumulation of thrombospodin-1 in human retinal pigment epithelial cells"Invest. Ophthalmol. Vis. Sci.. 41. 561-567 (2000)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Beppu, R. Nakunura, K., Miyajima,Uchida, H., Kuroki, Mu., Yamashita, Y., Shirakusa, T. alld Kuroki, Ma.: "Soluble thrombospodin-1 suppresses T-cell proliferation and enhances IL-1O secretion by antigen presenting cells in the presence of phytohemagglutinin"Cytokine.
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Tmamoto, T., Arakawa, F., Senba, T., Nakamura, K., Tomita, Y., Beppu, R., Kuroki, Mo., Matsumoto, H., Abe, H., Ueno, A. and Kuroki, Ma.: "Antitumor activity if combination of a mouse/human chimeric antibody to the MK-1 carcinoma-associated antigen and LAK cells"Proc. Jpn. Soc. Tumor Marker Res., Vol.14 (M. Ishii, ed.), Jpn. Soc. Tumor Marker Res., Tokyo. 153-155 (1999)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Kuroki, Ma., Xu, Z., Senba, T. and Arawaka, F.: "Missile therapy and immunogene therapy for cancer using carcinoembryonic antigen (CEA) as a target"Recent Research Development in Immunology, Vol.1 (S. G. Pandalai, ed.), Research Signpost, Korala. 1-8 (1999)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Nakamura,K.,Yuh,K.,Sugyo,S.,Kuroki,Ma.,Shijo,H.,Matsuka,Y.: "Unresponsiveness of peripheral T cells induced by intrusion of apoptotic bodies derived from autologous T cells"Cell.Immunol.. 19302. 147-154 (1999)
• [文献書誌] Emi,K.,Nakamura,K.,Yuh,K.,Sugyo,S.,Shijo,H.,Kuroki,Ma.and Tamura K.: "Magnitude of activity in chronic hepatitis C is influenced by apoptosis of T cells responsible for hepatitis C virus"J.Gastoroenterol.Hepatol.. 14・10. 1018-1024 (1999)
• [文献書誌] Kuroki,Ma.,Matsushita,H.,Matsumoto,H.,Hirose,Y.,Senda,T.and Yamamoto,T.:: "Nonspecific cross-reacting antigen-50/90(NCA-50/90)as a new tumor marker"Anticancer Res.. 19・6C. 5599-5606 (1999)
• [文献書誌] Miyajima-Uchida,H.,Hayashi,H,Beppu,R.,Kuroki,Mo.,Arakawa,F.,Kuroki,Ma: "Production and accumulation of thrombospondin-1 in human retinal pigment epithelial cells"Invest,Ophthalmol.Vis.Sci.. 41・2. 561-567 (2000)
• [文献書誌] 別府理智子,荒川文子,山本貴文,黒木 求,山下裕一,白日高歩,黒木政秀: "Human thrombospondin-1に対するIgGモノクローナル抗体の作製"日本癌学会総会記事. 89・Suppl.. 617 (1998)
• [文献書誌] 別府理智子,中村 研,黒木 求,黒木政秀: "トロンボスポンジン-1のマクロファージ及びT細胞のサトカイン産生に対する作用"日本免疫学会総会・学術集会記録. 29・1. 134 (1999)
• [文献書誌] Kuroki,Ma.,Xu,Z.,Senda,T.and Arakawa,F.: "Recent Research Developments in Immunology,Vol.1"Research Signpost(Korala). 120 (1999)
• [文献書誌] 山本貴文,荒川文子,中村研,黒木求,松本久伸,阿部裕典,黒木政秀: "腫瘍マーカー研究会誌,第14巻(石井 勝,編)"腫瘍マーカー研究会(東京). 184 (1999)
• [文献書誌] Senba,T.,Kuroki,Ma.,Arakawa,F.,Yamamoto,T.: "Tumor growth suppression by a mouse/human chimeric anti-CEA antibody and lymphokine-activated killer cells in vitro and in SCID mouse xenograft model" Anticancer Research. 18・1. 17-24 (1998)
• [文献書誌] Egawa,M.,Honda,Y.,Kuroki,Ma.and Ono,T.: "Immunohistochemical demonstratlon of carcinoembryonic antigen and related antigens in various cutaneous keratinous neoplasms and verruca vulgaris" British Journal of Dermatology. 139・2. 178-185 (1998)
• [文献書誌] Egawa,M.,Honda,Y.,Ono,T.,Kitasato,H.& Kuroki,Ma.: "The glycoprotein of the carcinoembryonic antigen(CEA)fgamily expressed on epithelial keratinocytes in viral warts." Archives of Dermatological Research. 290・8. 453-457 (1998)
• [文献書誌] 別府理智子,黒木政秀,仙波垂水,山本貴文,富田能弘,荒川文子: "ヒトトロンボスポンジン-1に対するモノクローナル抗体の作製" 日本癌学会総会記事. 56・1. 581 (1997)
• [文献書誌] 別府理智子,荒川文子,山本貴文,田能弘,黒木求,黒木政秀: "Human thrombospondin-1に対するIgGモノクローナル抗体の作製" 日本癌学会総会記事. 57・1. 617 (1998)
• [文献書誌] 黒木政秀,山本貴文,仙波垂水: "瘍関連抗原CEAの新しい利用法" Progress in Medicine. 18・5. 1063-1068 (1998)
• [文献書誌] 黒木政秀,荒川文子,仙波垂水,山本貴文,富田能弘,別府理智子: "腫瘍マーカー研究会誌第12巻(石井勝,編)" 腫瘍マーカー研究会(東京), 268 (1998)
• [文献書誌] 黒木政秀,山本貴文,許中偉,仙波垂水,富田能弘,別府理智子: "腫瘍マーカー研究会誌第13巻(石井勝,編)" 腫瘍マーカー研究会(東京, 197 (1998)