| 研究課題/領域番号 |
10680624
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
機能生物化学
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| 研究機関 | 大阪大学 |
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研究代表者 |
関口 清俊 大阪大学, 蛋白質研究所, 教授 (50187845)
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| 研究分担者 |
顧 建固 (顧 建国) 大阪大学, 蛋白質研究所, 助手 (30314420)
李 紹良 大阪大学, 蛋白質研究所, 助手 (40252720)
眞鍋 理一郎 大阪府立母子保健総合医療センター研究所, 研究員 (30280837)
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| 研究期間 (年度) |
1998 – 1999
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| 研究課題ステータス |
完了 (1999年度)
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| 配分額 *注記 |
3,300千円 (直接経費: 3,300千円)
1999年度: 1,400千円 (直接経費: 1,400千円)
1998年度: 1,900千円 (直接経費: 1,900千円)
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| キーワード | インテグリン / 基底膜 / ラミニン / ストレスファイバー / 接着斑 / CD151 / フィブロネクチン / シグナル伝達 / 細胞接着 / TM4SF |
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| 研究概要 |
1)成体基底膜の主要な接着分子であるα4鎖を含むラミニン-8とα5鎖を含むラミニン-10/11を精製し、そのインテグリン結合特異性を明らかにした。具体的には、ヒトグリオーマ細胞T98Gがα4鎖を含むラミニンを選択的に分泌することを明らかにし、このT98G細胞の培養上清からゲルろ過とイムノアフィニティークロマトグラフィーによりラミニン-8を均一に精製した。また、ヒト胎盤より精製したラモニンを抗原としてα5鎖に特異的な単クローン抗体5D6を作成し、この抗体を不溶化したカラムを用いて肺癌細胞株A549の培養上清より、ラミニン-10/11を精製する方法を確立した。これらの精製ラミニン標品のインテグリン結合特異性を検討し、インテグリンα3β1とα6β1の両方がラミニン-8およびラミニン-10/11のレセプターとして機能することを明らかにした。
2)CD151遺伝子を欠失したマウスを作成するため、CD151遺伝子のターゲティングベクターを構築し、これをマウスES細胞に導入して、相同組換えのおこった細胞をスクリーニングした。これまでに600個以上のコロニーについてスクリーニングを行ったが、これまでに相同組換えをおこした細胞を得ることはできなかった。
3)ラミニン-10/11に接着した細胞では、アクチンストレスファイバーと接着斑が形成されない(昨年度報告)。この理由を明らかにするため、低分子量G蛋白質であるRhoおよびRacの活性化の有無をラミニン-10/11に接着した細胞とフィブロネクチンに接着した細胞で比較検討した。その結果、ラミニン-10/11の上では、Racが速やかに活性化されることを見いだした。Rhoではなく、Racが優先的に活性化されることが、ラミニン-10/11上でストレスファイバーと接着斑が形成されない原因であると考えられる。
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