| 研究概要 |
Salmonella typhimuriumやLegionella pneumophillaなどの細胞内寄生菌はマクロファージ貪食によりストレス蛋白質を誘発し,食細胞内ストレスに耐えながら増殖する。我々はListeria monocytogenesの主要なストレス蛋白質DnaKシャペロンマクロファージ貪食における役割を明らかにする目的で,dnaK周辺の遺伝子をクローニングおよび塩基配列の決定を行った。その結果,本菌のdnaKはhrcA,grpE,dnaJと共にオペロンを構成していた。このオペロンの転写開始点をprimar extension analysisによって決定したところ,hrcA,grpE,dnaJの上流に存在していた。Northern blot解析の結果から,このオペロンは少なくとも4つの転写ユニットによって転写されていることが明らかとなった。さらにdnaKの挿入変異株を作成し,マクロファージ内増殖能を測定した結果,親株と同等であったことから,本菌がであるDnaKシャペロンの介助なしにマクロファージで増殖することを明らかにした。このことは本菌がマクロファージ貪食後直ちに殺菌物質に富むファゴソームから細胞質にエスケープし,そこで増殖することによるものである。一方,dnaK変異株の貪食率は親株に比較して顕著に低下していた。dnaK変異株は鞭毛を形成しない。このマクロファージ貪食率の低下は鞭毛が合成されないことによるかについて明らかにするため,flagellinの遺伝子であるflaAの挿入変異株を作成し,マクロファージ貪食率を測定したところ,dnaK変異株とほぼどう程度であったことからdnaK変異によるマクロファージ貪食率の低下は鞭毛が存在しないためであることが明らかとなった。
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