| 研究課題/領域番号 |
10770190
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| 研究種目 |
奨励研究(A)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
法医学
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| 研究機関 | 高知医科大学 |
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研究代表者 |
中西 祥徳 高知医科大学, 医学部, 助手 (10217763)
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| 研究期間 (年度) |
1998 – 1999
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| 研究課題ステータス |
完了 (1999年度)
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| 配分額 *注記 |
1,900千円 (直接経費: 1,900千円)
1999年度: 1,000千円 (直接経費: 1,000千円)
1998年度: 900千円 (直接経費: 900千円)
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| キーワード | MCT118(D1S80) / PNA / 磁気ビーズ |
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| 研究概要 |
MCT118(D1S80)部位の繰り返し配列の一部(配列1:CTT TCC GGT GGT CCT C)に相当するビオチン化PNA(PNA-1)を外注により作製した。配列1の相補鎖の合成も検討したが、G含有率が高いためPNA合成が不可能であった。まず、合成したPNA-1がMCT118部位の配列1にアニールするか否かを検討した。MCT118部位(T24/31型)のPCR産物(20μl)にPNA-1(1μg)を加え、95℃でPCR産物を2本鎖に変性し、65℃でPNA-1をアニールさせた。その後、ストレプトアビジンコート磁気ビーズ(20μl)を加え室温で3時間反応し、マグネットにより磁気ビーズを回収した。回収されたビーズをTris-HClバッファー(pH8.0)で3回洗浄後、95℃でPNAとDNAを解離させ、解離したDNAをTEバッファー10μlに溶解し、4%ポリアクリルアミド電気泳動した。PNA/磁気ビーズ処理後のものはT31alleleのバンドはほとんど消失し、T24alleleのバンド強度は減弱した。このことからPNA/磁気ビーズによるMCT118部位の捕捉は可能であったが、配列1の相補鎖のPNAを合成できなかったため、同部位の完全な捕捉はできなかったものと思われた。次に、血液からフェノール/クロロホルム抽出して得られたDNAにつき、PNA/磁気ビーズによるMCT118部位の位置するDNA部分のみの選択的単離を試みた。T24/31型のDNA50ngにつき、上記のごとくPNA-1を加え反応後、マグネットにより磁気ビーズを回収し、得られたDNA溶液5μlについてMCT118部位のPCRを行った。しかしPCR産物はほとんど得られず、genomeからのMCT118部位の位置するDNA部分のみの選択的単離は困難であった。現在さらに反応条件の検討を行っている。
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