| 研究概要 |
冠血管インターベンション後に再狭窄を引き起こす機序として、血管平滑筋細胞の遊走・増殖による内膜肥厚のメカニズムが重視されている。組織特異的プロモーター/エンハンサーを用いた特定の組織を遺伝子治療する方法が期待されているが、未だ平滑筋特異的プロモーターで確立されているものはない。我々がクローニングした平滑筋ミオシン重鎖(SM-MHC)遺伝子プロモーター(Katoh et al.,J Biol Chem 269:30538-30545,1994)は、少なくともin vitroの実験系では平滑筋特異的であることが示され、他施設での追試にても同様の臓器特異性が示されている。本研究では、SM-MHC遺伝子の平滑筋細胞特異性を保つ最小の領域をnarrow downし、その領域に結合する平滑筋細胞特異的転写因子のクローニングを試みた。まず、SM-MHC遺伝子の約18kbの1st Intronの中の5'側710bpのfragment中に平滑筋特異性を保つ領域ガ存在することをつきとめ、その領域の全塩基配列を決定した。塩基配列中には、三つのGATA siteをはじめ、いくつかのputative cis-trans elementが存在した。そのfragmentと平滑筋細胞より得た核抽出液を用いて、DNaseI footprintingを行ったところ上記のGATA siteの他にA/T-richなprotein binding siteが確認された。その塩基配列を用いてgel mobolity shift assayを行い、平滑筋細胞核抽出液中のprotein binding affinityを再確認したところ、このA/T-rich siteには複数の蛋白が結合する可能性が示唆された。現在その特異的塩基配列を用いたone hybrid systemを利用して、平滑筋細胞の特異性を規定していると思われる転写因子クローニングを継続中である。
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