| 研究概要 |
我々はマウス破骨細胞を用いて骨カルシウム代謝調節ホルモンであり,また骨代謝疾患の治療薬剤でもある力ルシトニンの作用機構に関して検討した.ごく最近まではヒト破骨細胞を生化学的側面から研究できる量を確保することは困難であったが,破骨細胞誘導因子とマクロファージ分化誘導因子を用いてヒト末梢血単核球から成熟破骨細胞をin vitroで作製できることが報告され,我々は本法で得た破骨細胞を用いてヒトでの力ルシトニン受容体の制御機構も検討した. ヒト破骨細胞様細胞を力ルシトニンで24時間処理したところ用量依存性に[^<125>I]サケCT特異的結合能を減少させ、 この変化は細胞膜表面での力ルシトニン受容体数の減少によることがScatchard解析により示された.ヒトカルシトニンはサケカルシトニンよりも約100-1000倍の高濃度でほぼ同程度の受容体数の減少をきたした。細胞内シグナリングの関与としてはphorbol myristate acetate(PMA)によるプロテインキナーゼC経路の活性化が細胞膜表面上の受容体数を力ルシトニンの場合とほぼ同程度に減少させたのに対して,Forskolin,dbcAMP,cholera toxinによるプロテインキナーゼA経路の活性化が受容体数に及ぼす影響は軽度であった。CTはCTR mRNAの減少を誘導したが、この効果はPMA処理でも同様の効果が得られた。
またマウス破骨細胞での検討では力ルシトニンによる力ルシトニン受容体のmRNA低下作用は受容体遺伝子のmRNAレベルでの安定性の低下が最大規定因子と予想された。mRNAの安定性を支配する因子としてmRNAの3'非翻訳領域にあるAdenosine, Uridineに富む領域(AU-rich element:ARE)の存在が重要な意義を有することが示されつつある.今回の検討では明らかな結合因子として既存の分子の介在は証明し得なかったが、破骨細胞核内蛋白との共存によりmRNAの安定性が急速に低下したことから何らかの因子が作用している可能性が孝えられた。
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