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Arylhydrocarbon receptor の細胞内機能の解析

研究課題

研究課題/領域番号 10771330
研究種目

奨励研究(A)

配分区分補助金
研究分野 環境系薬学
研究機関埼玉県立がんセンター

研究代表者

生田 統悟  埼玉県立がんセンター, 研究所, 研究員 (00262072)

研究期間 (年度) 1998 – 1999
研究課題ステータス 完了 (1999年度)
配分額 *注記
1,900千円 (直接経費: 1,900千円)
1999年度: 600千円 (直接経費: 600千円)
1998年度: 1,300千円 (直接経費: 1,300千円)
キーワードダイオキシン / Ah レセプター / PAS蛋白質 / シヤトル蛋白質 / シャトル蛋白質 / CYPIAI
研究概要

1.免疫染色によるAh receptor 細胞内局在の解析
我々はAh receptor の細胞内局在を制御しているシグナル配列を決定するため、この配列を含む短いペプチド配列とGST-GFPとの融合タンパクを用いて解析をおこなってきた。本年度は細胞に発現させた全長AhRの局在様式を解析する為、Hisタグを融合したAhRの細胞内局在を、蛍光抗体による細胞染色で調べた。マウスHepa1c1c7細胞でHis-AhRを一過性に発現させた。コントロール細胞で主に細胞質に局在したのに対し、AhRリガンドであるメチルコランスレン(MC)処理すると核に局在した。一方、核外移行を阻害するレプトマイシンで処理によっても核局在が観察された。これらより、全長のAhRタンパク質についても核ー細胞質間を往復していることが示された。
2.細胞内シグナル伝達系によるAhRの活性調節
AhRの活性は細胞に内在するリガンドによって調節されていると考えられるが、ステロイドホルモン受容体や他の核内受容体で観察されているように、リン酸化などを介したシグナル伝達経路によっても制御されている可能性がある。そこで、細胞内シグナル伝達に重要な役割をもつRasタンパク質のAhR活性への影響を、AhR/ARNTが認識するXRE配列およびCYP1A1の5 '上流領域を連結したLuciferase発現プラスミドを用いて検討した。Hepa1c1c7細胞に活性化型Rasを遺伝子導入し、さらに細胞をMC処理すると、それぞれ単独処理と比べて高いLuciferase活性が検出された。このことはwestern blotにより検出されたCYP1A1タンパク質量によっても再現された。これらの結果から、AhR/ARNTによる転写調節機能はRasのシグナル系によって調節を受けることが示唆された。

報告書

(2件)
  • 1999 実績報告書
  • 1998 実績報告書
  • 研究成果

    (3件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (3件)

  • [文献書誌] Togo Ikuta: "Nucleocytoplasmic Shuttling of Arylhydrocarbon receptor"Journal of Biochemistry. 127. 503-509 (2000)

    • 関連する報告書
      1999 実績報告書
  • [文献書誌] 生田統悟: "Ah レセプター"遺伝子医学. 3(2). 144-148 (1999)

    • 関連する報告書
      1999 実績報告書
  • [文献書誌] 生田統悟: "ダイオキシン レセプターの細胞質-核間輸送"実験医学. 17(18). 78-84 (1999)

    • 関連する報告書
      1999 実績報告書

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公開日: 1998-04-01   更新日: 2016-04-21  

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