| 研究課題/領域番号 |
10877017
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| 研究種目 |
萌芽的研究
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
薬理学一般
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| 研究機関 | 三重大学 |
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研究代表者 |
田中 利男 三重大学, 医学部, 教授 (00135443)
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| 研究分担者 |
西村 有平 三重大学, 医学部, 助手 (30303720)
林 正晃 三重大学, 医学部, 助手 (80291417)
中 充子 三重大学, 医学部, 助手 (10093139)
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| 研究期間 (年度) |
1998
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| 研究課題ステータス |
完了 (1998年度)
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| 配分額 *注記 |
1,600千円 (直接経費: 1,600千円)
1998年度: 1,600千円 (直接経費: 1,600千円)
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| キーワード | カルシウム / カルシウム結合蛋白質 / EFハンド / ESTデータベース / in silico cDNAクローニング / 悪性腫瘍 |
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| 研究概要 |
近年、国際的ヒトゲノムプロジェクトの進展は著しいものがあり、特にEST(expressed sequence tag)プロジェクトにより、現在ではヒト発現遺伝子断片のほとんどがESTデータベースに登録されるようになった。我々は、かねてよりESTデータベースに注目し、サイバー上における新しいヒトカルシウム結合蛋白質のcDNAクローニングを試みた。独自に開発したデータ処理ソフトウェア、インターネット技術、シークエンスアッセンブラーソフトウェア、PCRテクノロジーを統合的に駆使することにより、現在までに全く報告されてない新しいカルシウム結合蛋白質のcDNAクローニング(ヒト、ウシ、ラット)に成功し、Calmedulinと命名した。この全く新しいカルシウム結合蛋白質は、いわゆるEFハンド蛋白質ファミリーであり、その分子構造が最も近いものは、centrinである。centrinは高等動物では中心体に局在し、細胞周期制御に関与していC驍アとが強く示唆されている。
そこで今年度の本研究では下記の成果が得られた。
(1) ポリクローナル抗体を作製しました。
(2) その発現は全身に認められるが、特に胎児期での遺伝子発現が著明で成長とともに減少していることを明らかにした。
(3) ほとんどのヒト癌において過剰発現が認められることを明らかにした。
(4) 大腸菌を用いて組み換え蛋白質を作製・精製した。
(5) 精製したcalmedulin蛋白質を用い、アフィニテークロマトグラフィーを行った結果、幾つかの結合蛋白質を見出した。その中の一つにreticulocalbinと高い相同性を有する蛋白質を認めた。
今後、さらにその結合様式、結合定数、分子構造解析により、Calmedulinの生理的役割とカルシウムシグナル伝達機構を明らかにする予定である。
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