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ヒト人工染色体を用いた血友病の新規治療法の開発

研究課題

研究課題/領域番号 10J00264
研究種目

特別研究員奨励費

配分区分補助金
応募区分国内
研究分野 血液内科学
研究機関鳥取大学

研究代表者

矢倉 裕奈  鳥取大学, 大学院・医学系研究科, 特別研究員(DC1)

研究期間 (年度) 2010 – 2012
研究課題ステータス 完了 (2012年度)
配分額 *注記
2,100千円 (直接経費: 2,100千円)
2012年度: 700千円 (直接経費: 700千円)
2011年度: 700千円 (直接経費: 700千円)
2010年度: 700千円 (直接経費: 700千円)
キーワード血友病A / 遺伝子治療 / ヒト人工染色体 / 血小板特異的発現
研究概要

血液凝固第VIII因子の遺伝子異常により発症する血友病Aでは、主にウイルスベクターを用いた遺伝子治療法の開発が進められてきたが、抗ウイルス抗体の出現やがん化の懸念などが払拭できない。本研究は、宿主染色体とは独立かつ安定に保持され、自律複製するヒト人工染色体ベクター(HAC)を用いて、安全性の高い遺伝子治療法を開発することを目的としている。
本年度は、VIII因子搭載HACを血友病Aモデルマウス由来iPS細胞(前年度に樹立済み)に微小核細胞融合法を用いて導入し、得られたクローンの解析を行った。細胞融合後に出現した薬剤耐性クローンのうち、ゲノムPCR法により搭載したVIII因子遺伝子の存在を確認でき、また、キナクリン・ヘキスト染色および蛍光in situハイブリダイゼーション(FISH)解析にて正常核型かつVIII因子搭載HACを独立保持するクローンを4つ取得した。免疫染色法およびRT-PCR法にて初期化4因子の発現消失が認められ、かつ未分化マーカーの発現を認めた2クローンでOP9共培養法によるin vitro分化誘導を行い、RT-PCR法にて巨核球・血小板へ分化したサンプルのみでVIII因子の発現を確認した。本ベクターは巨核球・血小板特異的な発現を誘導するplatelet factor-4(PF4)プロモーターを用いていることから、in vitroにおいてではあるが、組織特異的にVIII因子の発現を誘導することを示した。一方、前年度に構築したVIII因子搭載マウス人工染色体(MAC)もまた同モデルマウス由来iPS細胞に導入して同様にクローンを8つ取得し、モデルマウスを用いたin vivoでの治療効果の検証のために使用可能なクローンを選定した。実際の治療効果の検証まではできなかったが、本年度までの研究でそのための資材を揃えることができた。

報告書

(3件)
  • 2012 実績報告書
  • 2011 実績報告書
  • 2010 実績報告書
  • 研究成果

    (12件)

すべて 2013 2012 2011 2010 その他

すべて 雑誌論文 (3件) (うち査読あり 3件) 学会発表 (9件)

  • [雑誌論文] An induced pluripotent stem cell-mediated and integration-free factor VIII expression system.2013

    • 著者名/発表者名
      Yakura y, et. al.
    • 雑誌名

      Biochemical Biophysical Research Communications

      巻: 431 号: 2 ページ: 336-341

    • DOI

      10.1016/j.bbrc.2012.12.096

    • 関連する報告書
      2012 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Integration-free and stable expression of FVIII using a human artificial chromosome2011

    • 著者名/発表者名
      Kurosaki H, et.al.
    • 雑誌名

      Journal of Human Genetics

      巻: 56 号: 10 ページ: 727-733

    • DOI

      10.1038/jhg.2011.88

    • 関連する報告書
      2011 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Effect of dibutyryl cyclic adenosine monophosphate on the gene expression of plasminogen activator inhibitor-1 and tissue factor in adipocytes

    • 著者名/発表者名
      Makoto Taniguchi
    • 雑誌名

      Thrombosis Research

      巻: (掲載確定)

    • 関連する報告書
      2010 実績報告書
    • 査読あり
  • [学会発表] 人工染色体ベクターを用いた新規血友病A遺伝子治療法の開発2012

    • 著者名/発表者名
      矢倉 裕奈
    • 学会等名
      第11回日本再生医療学会総会
    • 発表場所
      パシフィコ横浜
    • 年月日
      2012-06-14
    • 関連する報告書
      2012 実績報告書
  • [学会発表] ヒト人工染色体を用いた血小板特異的FVIII発現iPS細胞の作製―新規治療法確立へ向けて―2012

    • 著者名/発表者名
      矢倉 裕奈
    • 学会等名
      第34回日本血栓止血学会学術集会
    • 発表場所
      ハイアツトリージェンシー東京
    • 年月日
      2012-06-09
    • 関連する報告書
      2012 実績報告書
  • [学会発表] Transcription factor NEAT but not NF-κB is essential for thrombin-induced tissue factor expression2011

    • 著者名/発表者名
      矢倉裕奈
    • 学会等名
      XXIIIrd Congress of the International Society on Thrombosis and Haematostasis (ISTH)
    • 発表場所
      京都国際会議場(京都)
    • 年月日
      2011-07-28
    • 関連する報告書
      2011 実績報告書
  • [学会発表] スフィンゴシン1-リン酸によるMonocyte chemoattractant protein-1 (MCP-1)の遺伝子発現誘導経路の解析2010

    • 著者名/発表者名
      武谷浩之
    • 学会等名
      第33回日本分子生物学会年会・第83回日本生化学会大会合同大会
    • 発表場所
      ポートアイランド(神戸)
    • 年月日
      2010-12-09
    • 関連する報告書
      2010 実績報告書
  • [学会発表] Pathophysiology of thrombocytopenia in mice lacking sphingomyelin synthase 12010

    • 著者名/発表者名
      林輝
    • 学会等名
      第33回日本分子生物学会年会・第83回日本生化学会大会合同大会
    • 発表場所
      ポートアイランド(神戸)
    • 年月日
      2010-12-09
    • 関連する報告書
      2010 実績報告書
  • [学会発表] トロンビンによる組織因子の遺伝子発現誘導における転写因子の解析2010

    • 著者名/発表者名
      矢倉裕奈
    • 学会等名
      第33回日本分子生物学会年会・第83回日本生化学会大会合同大会
    • 発表場所
      ポートアイランド(神戸)
    • 年月日
      2010-12-08
    • 関連する報告書
      2010 実績報告書
  • [学会発表] スフィンゴミエリン合成酵素1-κOマウスの解析:血小板減少について2010

    • 著者名/発表者名
      林輝
    • 学会等名
      第5回スフィンゴテラピー研究会
    • 発表場所
      米子市観光センター(米子)
    • 年月日
      2010-07-16
    • 関連する報告書
      2010 実績報告書
  • [学会発表] トロンビンによる組織因子の発現誘導にNF-κBの活性化は必須ではない2010

    • 著者名/発表者名
      矢倉裕奈
    • 学会等名
      第33回日本血栓止血学会学術集会
    • 発表場所
      城山観光ホテル(鹿児島)
    • 年月日
      2010-04-24
    • 関連する報告書
      2010 実績報告書
  • [学会発表] スフィンゴミエリン合成酵素1の遺伝子欠損マウスは血小板数減少を来す2010

    • 著者名/発表者名
      林輝
    • 学会等名
      第33回日本血栓止血学会学術集会
    • 発表場所
      城山観光ホテル(鹿児島)
    • 年月日
      2010-04-24
    • 関連する報告書
      2010 実績報告書

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公開日: 2010-12-03   更新日: 2024-03-26  

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