| 研究課題/領域番号 |
10J00264
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| 研究種目 |
特別研究員奨励費
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 国内 |
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| 研究分野 |
血液内科学
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| 研究機関 | 鳥取大学 |
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| 特別研究員 |
矢倉 裕奈 鳥取大学, 大学院・医学系研究科, 特別研究員(DC1)
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| 研究期間 (年度) |
2010 – 2012
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| 研究課題ステータス |
完了 (2012年度)
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| 配分額 *注記 |
2,100千円 (直接経費: 2,100千円)
2012年度: 700千円 (直接経費: 700千円)
2011年度: 700千円 (直接経費: 700千円)
2010年度: 700千円 (直接経費: 700千円)
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| キーワード | 血友病A / 遺伝子治療 / ヒト人工染色体 / 血小板特異的発現 |
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| 研究概要 |
血液凝固第VIII因子の遺伝子異常により発症する血友病Aでは、主にウイルスベクターを用いた遺伝子治療法の開発が進められてきたが、抗ウイルス抗体の出現やがん化の懸念などが払拭できない。本研究は、宿主染色体とは独立かつ安定に保持され、自律複製するヒト人工染色体ベクター(HAC)を用いて、安全性の高い遺伝子治療法を開発することを目的としている。
本年度は、VIII因子搭載HACを血友病Aモデルマウス由来iPS細胞(前年度に樹立済み)に微小核細胞融合法を用いて導入し、得られたクローンの解析を行った。細胞融合後に出現した薬剤耐性クローンのうち、ゲノムPCR法により搭載したVIII因子遺伝子の存在を確認でき、また、キナクリン・ヘキスト染色および蛍光in situハイブリダイゼーション(FISH)解析にて正常核型かつVIII因子搭載HACを独立保持するクローンを4つ取得した。免疫染色法およびRT-PCR法にて初期化4因子の発現消失が認められ、かつ未分化マーカーの発現を認めた2クローンでOP9共培養法によるin vitro分化誘導を行い、RT-PCR法にて巨核球・血小板へ分化したサンプルのみでVIII因子の発現を確認した。本ベクターは巨核球・血小板特異的な発現を誘導するplatelet factor-4(PF4)プロモーターを用いていることから、in vitroにおいてではあるが、組織特異的にVIII因子の発現を誘導することを示した。一方、前年度に構築したVIII因子搭載マウス人工染色体(MAC)もまた同モデルマウス由来iPS細胞に導入して同様にクローンを8つ取得し、モデルマウスを用いたin vivoでの治療効果の検証のために使用可能なクローンを選定した。実際の治療効果の検証まではできなかったが、本年度までの研究でそのための資材を揃えることができた。
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