| 研究課題/領域番号 |
11149216
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| 研究種目 |
特定領域研究(A)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究機関 | 奈良先端科学技術大学院大学 |
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研究代表者 |
高橋 直樹 奈良先端科学技術大学院大学, バイオサイエンス研究科, 教授 (30179501)
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| 研究分担者 |
岡南 政宏 奈良先端科学技術大学院大学, バイオサイエンス研究科, 助手 (70294288)
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| 研究期間 (年度) |
1999
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| 研究課題ステータス |
完了 (1999年度)
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| 配分額 *注記 |
2,500千円 (直接経費: 2,500千円)
1999年度: 2,500千円 (直接経費: 2,500千円)
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| キーワード | 転写調節 / 動物発生 / ホメオボックス / 線虫 / ゲノム情報 / 標的遺伝子 |
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| 研究概要 |
高等植物の発生過程は多くの転写因子の空間的、時間的に特異な発現によってコントロールされていると考えられる。ホメオボックスやZnフィンガーなどのモチーフを利用したスクリーニングやゲノムプロジェクトなどによって、これまでに数多くの転写因子をコードする遺伝子がクローン化されてきた。しかしこれらの転写因子が発現制御する標的遺伝子群についてはほとんど明らかにされていない。我々はマウスを実験材料として、転写因子の抗体を用いた標的遺伝子クローン化法を開発し、Hox遺伝子のいくつかの標的遺伝子を特定してきた。本研究の目的は、ゲノム情報の明らかになっている線虫をモデル動物として、効率の良い標的遺伝子群の単離法を開発し、多くの動物種で保存されている、発生過程における転写調節機構を明らかにすることである。昨年度作製したタグ付き転写因子導入線虫個体を用いて、転写因子が生体内で結合している配列を濃縮したDNAプールを調製した。この中に濃縮された配列(標的配列)をゲノムDNAチップを用いて検出することができることを示すためにチップを試作し、条件の検討を行った。昨年度作製した、短い(約100bp)線虫ゲノムDNA断片をλgt10ベクターに組み込んだライブラリーを用い、その挿入配列をPCR法によって調製した。このゲノム断片をスポットしたゲノムDNAチップを試作した。線虫全ゲノム中の標的配列を明らかにするためには、10万スポットのチップを必要とするが、今回は1000スポットのチップを作製し、ラジオアイソトープラベルプローブによる検出、Cy3,Cy5を用いた comparative hybridizationなどの条件について検討を行った。
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