| 研究課題/領域番号 |
11161232
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| 研究種目 |
特定領域研究(A)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 審査区分 |
生物系
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| 研究機関 | 関西医科大学 |
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研究代表者 |
木村 富紀 関西医科大学, 医学部, 教授 (40186325)
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| 研究分担者 |
山本 章嗣 関西医科大学, 医学部, 講師 (30174775)
西川 正雄 関西医科大学, 医学部, 助手 (40218136)
藤澤 順一 関西医科大学, 医学部, 教授 (40181341)
徳永 万喜洋 国立遺伝学研究所, 構造遺伝学研究センター, 助教授 (00192659)
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| 研究期間 (年度) |
1999
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| 研究課題ステータス |
完了 (1999年度)
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| 配分額 *注記 |
2,100千円 (直接経費: 2,100千円)
1999年度: 2,100千円 (直接経費: 2,100千円)
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| キーワード | HIV-1 Rev / アクチン線維束 / RNA核外輸送 / RRE mRNA / luciferase mRNA / 能動輸送 / CRM1 |
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| 研究概要 |
1.HIV-1 gag mRNAとRev、CRM1、Ran-GTPaseは核内F-アクチン上で核外輸送シグナル依存性に共存することを確認した。2.G-アクチンに特異的に結合し、F-アクチンを脱重合するLatrunculinB(LAT-B)を作用させたところ、上記細胞因子の共存は消失しgag mRNAの核外輸送は阻害された。3.この輸送阻害効果は可逆的であり、LAT-B除去後遺伝子導入細胞はgag mRNA輸送を再開した。そこで、この細胞を4℃に置いたところ、37℃に置いた場合とは異なり、RNA輸送の再度の阻害が認められた。以上の結果から、RRE RNA-Rev複合体の輸送は温度感受性であると結論した。4.GST-Revに核抽出液を加え共沈するCRM1を指標にRev-CRM1複合体形成の温度感受性を検討したところ、両者の結合は4℃では観察されなかった。また、この温度依存性の結合がGTPgSの添加により濃度依存的に抑制されるのが観察された。5.イントロンレスのluciferase mRNAの核外輸送は、RRE mRNAの輸送と同様温度感受性であると共に、CRM1とGTP結合型RanGTPaseを必要とし、LAT-Bにより阻害されることが観察された(Kimura et al.in preparation)。
これまでmRNAの核外輸送は、単純拡散によりエネルギー非依存性に核外輸送されると考えられてきたが、以上の結果はイントロンを含むRev依存性のRRE RNAならびにイントロンレスのluc mRNAは、拡散によらず、核内F-アクチンを介し能動的に輸送されることを強く示唆した。
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