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トランスジェニック鳥類作製を効率化するための染色体工学的研究

研究課題

研究課題/領域番号 11450313
研究種目

基盤研究(B)

配分区分補助金
応募区分一般
研究分野 生物・生体工学
研究機関名古屋大学

研究代表者

飯島 信司  名古屋大学, 工学研究科, 教授 (00168056)

研究分担者 西島 謙一  名古屋大学, 工学研究科, 助手 (10262891)
上平 正道  名古屋大学, 工学研究科, 助教授 (40202022)
研究期間 (年度) 1999 – 2000
研究課題ステータス 完了 (2000年度)
配分額 *注記
14,900千円 (直接経費: 14,900千円)
2000年度: 5,500千円 (直接経費: 5,500千円)
1999年度: 9,400千円 (直接経費: 9,400千円)
キーワードトランスジェニック / 始原生殖細胞 / ニワトリ / トランスフェクション / 遺伝子組換え / インテグラーゼ / インテグレーション / ヒト成長ホルモン / オボアルブミン
研究概要

本年度はウイルスベクターを用いて鳥類胚細胞染色体に安定に遺伝子を組込むことを試みた。レトロウイルスを用いてウズラに遺伝子導入することを試みた。このため、宿主域が広く、濃縮が可能なVSVの外皮タンパクを持つモロニー白血病ウイルスを用いた。まずこのウイルスDNAにウイルスLTRからパントロピックな発現するよう緑色蛍光を発するGFP遺伝子を挿入し、つづいてウイルス内部領域にラウス肉腫ウイルスLTRプロモーターの制御下にネオマイシン遺伝子が発現するようこれらの遺伝子を連結した。この導入DNAをモロニー白血病ウイルスのgag及びpol遺伝子を発現するヘルパーセルラインに導入して安定形質転換株を得た。この株にVSVのGタンパクをコードする遺伝子DNAを一過性発現法にて導入し、感染性であるが複製能のないウイルス粒子を得た後、この粒子を超遠心で50,000G,2時間濃縮し、10^9cfu/ml程度のウイルス液を得た。さらにこのウイルス溶液を放卵直後のウズラ桑実胚に感染させた後、ニワトリホスト卵殻で孵化させたところ、ほぼ100%の確立でモザイク状だがほぼ全身の細胞に遺伝子が導入されていた。

報告書

(3件)
  • 2000 実績報告書   研究成果報告書概要
  • 1999 実績報告書
  • 研究成果

    (3件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (3件)

  • [文献書誌] Shinji Mizuarai,Masamichi Kamihira,Ken-Ichi Nishijima and Shinji Iijima: "Integrase-mediated nonviral gene transfection with enhanced integration efficiency"Journal of Bioscience and Bioengineering. 88[5]. 461-467 (1999)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2000 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Yuichi Machida, Katsuhide Miyake, Kouji Hattori, Shin Yamamoto, Mitsuo Kawase and Shinji Iijima: "Structure and function of a novel coliphage-associated sialidase"FEMS Microbiology Letters. 182. 333-337 (2000)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2000 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Shinji Mizuarai, Masamichi Kamihira, Ken-Ichi Nishijima and Shinji Iijima: "Integrase-mediated nonvital gene transfection with enhanced integration efficiency"Joumal of Bioscience and Bioengineering. 88[5]. 461-467 (1999)

    • 関連する報告書
      2000 実績報告書

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公開日: 1999-04-01   更新日: 2016-04-21  

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