| 研究課題/領域番号 |
11470006
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
解剖学一般(含組織学・発生学)
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| 研究機関 | 京都府立医科大学 |
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研究代表者 |
河田 光博 京都府立医科大学, 医学部, 教授 (60112512)
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| 研究分担者 |
森田 規之 京都府立医科大学, 医学部, 講師 (50239662)
西 真弓 京都府立医科大学, 医学部, 講師 (40295639)
小澤 一史 京都府立医科大学, 医学部, 助教授 (60169290)
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| 研究期間 (年度) |
1999 – 2000
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| 研究課題ステータス |
完了 (2000年度)
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| 配分額 *注記 |
14,700千円 (直接経費: 14,700千円)
2000年度: 6,300千円 (直接経費: 6,300千円)
1999年度: 8,400千円 (直接経費: 8,400千円)
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| キーワード | GFP / 培養細胞 / グルココルチコイドレセプター / ミネラルコルチコイドレセプター / エストロゲンレセプター / リアルタイムイメージング / アンドロゲンレセプター / 細胞質・核移行 / リガンド |
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| 研究概要 |
低分子脂溶性生理活性物質(ステロイドホルモンをはじめ、甲状腺ホルモン、ビタミンA(レチノイド)、ビタミンDさらに一群のエイコサノイドなど)のレセプターとGFP(green fluorescent protein)およびその改変型蛍光タンパク(BFP,CFP,YFP)とのキメラ遺伝子を作成し、株化細胞と神経系培養細胞(特定領域からのニューロンとグリア)に強制発現させ、生細胞内で可視化されたレセプタータンパクの局在の動態をリアルタイムイメージング法によって追究した。GR(グルココルチコイドレセプター)、MR(ミネラルコルチコイドレセプター)、ER(エストロゲンレセプター)、AR(アンドロゲンレセプター)さらには共役因子タンパクSRC-1、P300などについて検討し、GRやMRはリガンド依存性に細胞質から核へ移動し、その移行は微小管によらないことを明らかにした。また、geldanamycin投与によってHSP90がその輸送に強く関っていることを明らかにした。GRが細胞質から核へ移行すると、核内での共役因子タンパクSRC-1は塊状構造が消失した。またGRやMRの核内での分布様相はRNA polymeraseIIと完全には一致しなかった。ERについては上記と異なり、リガンドがない状態においても核に分布しており、リガンド投与によって核内の分布様相は均一なものから不均一に塊状を形成することが明らかとなった。ERの欠損ミュータントプラスミッドを作成し、それぞれのERのドメインについて核内様相に対する役割を検討した。ARについては、テストステロン投与によって細胞質から核へ移行したが、エストロゲン投与によってもこれらの移動が見られた。また、濃度によっては両者の核への移動に差異が認められた。
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