レーザーマイクロダイセクションを用いたCAGリピートの不安定化機構の研究

• 研究課題/領域番号: 11470148
• 研究種目: 基盤研究(B)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 神経内科学
• 研究機関: 自治医科大学
• 研究代表者: 瀧山 嘉久 自治医科大学, 医学部, 講師 (00245052)
• 研究分担者: 滑川 道人 自治医科大学, 医学部, 助手 ; 嶋崎 晴雄 自治医科大学, 医学部, 助手 (30316517) ; 西澤 正豊 国際医療福祉大学, 教授 (80198457)
• 研究期間 (年度): 1999 – 2000
• 研究課題ステータス: 完了 (2000年度)
• 配分額: 14,100千円 (直接経費: 14,100千円); 2000年度: 4,200千円 (直接経費: 4,200千円); 1999年度: 9,900千円 (直接経費: 9,900千円)
• キーワード: レーザーマイクロダイセクション / CAGリピート / meiotic instability / mitotic instability / MJD / SCA6 / 臍帯血 / Huntington病

研究概要

我々は、これまでCAGリピート病の病態を解明する上で極めて重要な課題である、「リピートの不安定化機構」を解明するために研究を継続してきた。平成11-12年度は、meiotic instabilityとmitotic instabilityの分子機構について研究を行った。Meiotic instabilityについては,(1)Huntington病(HD)exon 1のreplacement mouse(homozygote)の精祖細胞・精母細胞・精子細胞・精子の単一細胞群をlaser-captured microdissection(LCM)を用いて単離して,CAGリピート数の解析を行った.解析に用いたmouseではCAGリピート数は細胞が分化するにつれて減少する傾向にあり,精子細胞は精母細胞に比べて有意にリピート数が減少することが判明した(Mann-Whitney U test,P<0.05).CAGリピート数の分散値は,精祖細胞と精母細胞、精祖細胞と精子細胞の間で有意に小さくなっていた(F-test,P<0.05).(2)spinocerebellar ataxia type 6(SCA6)家系において,20リピートが26リピートに,19リピートが20リピートに増大した例(de novo expansion)を見出し,これまで世代間でCAGリピートは安定していると考えられていたSCA6においても,比較的長い正常リピートは病的範囲に増大しうることをはじめて直接示した.Mitotic instabilityについては,(1)LCMを用いてMachado-Joseph病(MJD)患者2例の小脳皮質(分子層,Purkinje細胞層,顆粒層),白質の各単一細胞群のCAGリピート数の解析を行った.2例とも皮質は白質に比し有意にリピート数は小さく(Mann-Whitney U test,P<0.005-0.05),小脳皮質各細胞層間でのリピート数の有意差は認められなかったが,顆粒層>分子層>Purkinje細胞層の順にrepeat数が短くなる傾向にあった.(2)MJD・HD患者の保存臍帯を用い,臍帯血と23年後(MJD),37年後(HD)の末梢血のCAGリピートのmosaisismを比較検討した.その結果,CAGリピート病の血液細胞のmosaicismは,時間経過とともに有意に増大することをはじめて示した(Mann-Whitney U test,P<0.005).

研究成果

• [文献書誌] Yamashita I: "A novel locus for dominant cerebellar ataxia (SCA14) maps to a10,2-CM interval flanked by D19S206 and D19S605 on chromosome19q13,4-qter."Ann Neurol. 48. 156-163 (2000)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Shimohata T: "Expanded polyslutamine stretches interact with TAFII130, interfering with CRER-dependent transcription."Nature Genet. 26. 29-36 (2000)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Yabe I: "Predisposing chromosome of spinocerebellar ataxia type 6 (SCA6) in Japanese."J Med Genet. (in press).
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Zhou YX: "Spinocerebellar ataxia type1 in Chian : molecular analysis and genotype-phenotype correlation in five families."Arch Neurol. (in press).
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Shimazaki H: "Meiotic instability of the CAG repeats in the SCA6/CACNALA gene in two Japanese SCA6 families."J Neurol Sci. (in press).
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Namekawa M: "A large Japanese SPG4 family with a novel insertion mutation of the SPG4 gene ; a clinical and genetic study."J Neurol Sci. (in press).
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] 法化図陽一: "Spino cerebellar ataxia type6(SCA6)の-家系:その臨床徴候を主体に."臨床神経. (印刷中).
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] 滝山嘉久: "遺伝性神経筋疾患の最新情報:Machado-Joseph病"内科. (印刷中).
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Takiyama, Y.et al.: "Single sperm analysis of the CAG repeats in the gene for dentatorubral-pallidoluysian atrophy (DRPLA) : the instability of the CAG repeats in the DRPLA gene is prominent among the CAG repeat diseases."Hum.Mol.Genet.. 8. 453-457 (1999)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Takiyama, Y.et al.: "An unusual case of facial diplegia."Muscle & Nerve. 22. 778-779 (1999)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Kawakami, T.et al.: "A case of McLeod syndrome with unusually severe myopathy."J.Neurol.Sci. 166. 36-39 (1999)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Sawada, M.et al.: "Vocal cord paralysis in spinal and bulbar muscular atrophy."Igaku no Ayumi. 191 (in Japanese). 833-835 (1999)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Kawakami, T.et al.: "An unusual case of epilepsy exhibiting gelastic seizure, simple visual hallucination, and transient swelling of the left parieto-occipital region."Clin.Neurol. 40 (in Japanese). 24-28 (2000)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Yamashita, I.et al.: "A novel locus for dominant cerebellar ataxia (SCA 14) maps to a 10.2-cM interval flanked by D19S206 and D19S605 on chromosome 19q13.4-qter."Ann Neurol. 48. 156-163 (2000)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Hokezu, Y.et al.: "A clinical features of a famaily with spinocerebellar ataxia type 6 (SCA6)."Oita Kenritsu Byoin Igaku Zasshi. 29 (in Japanese). 113-117 (2000)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Shimohata, T.et al.: "Expanded polyglutamine stretches interact with TAF_<II>130, interfering with CREB-dependent transcription."Nature Genet. 26. 29-36 (2000)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Yabe, I.et al.: "Predisposing chromosome of spinocerebellar ataxia type 6 (SCA6) in Japanese."J Med Genet. (in press).
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Zhou, Y.-X.et al.: "Spinocerebellar ataxia type 1 in China : molecular analysis and genotype-phenotype correlation in five families."Arch Neurol. (in press).
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Hokezu, Y.et al.: "A familial case of spinocerebellar ataxia type 8 (SCA8) : its clinical findings and an issue about the genetic basis."Clin. Neurol.. (in Japanese, in press).
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Shimazaki, H.et al.: "Meiotic instability of the CAG repeats in the SCA6/CACNA1A gene in two Japanese SCA6 families"J Neurol Sci. (in press).
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Namekawa, M.et al.: "A large Japanese SPG4 family with a novel insertion mutation of the SPG4 gene : a clinical and genetic study."J Neurol Sci. (in press).
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Takiyama, Y.et al.: "Late cortical cerebellar atrophy"Medical Syndromes of Neurological Diseases II, Nippon Rinsho, Osaka. (in Japanese). 247-250 (2000)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Takiyama, Y.: "Machado-Joseph disease."Naika. (in Japanese, in press).
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Yamashita I: "A novel locus for dominant cerebellar ataxia (SCA14) maps to a 10.2-cM interval flanked by D19S206 and D19S605 on chromosome 19q13.4-qter."Ann Neurol. 48・2. 156-163 (2000)
• [文献書誌] Shimohata T: "Expanded polyglutamine stretches interact with TAF_<II> 130, interfering with CREB-dependent transcription."Nature Genet. 26・1. 29-36 (2000)
• [文献書誌] Yabe I: "Predisposing chromosome of spinocerebellar ataxia type 6 (SCA6) in Japanese."J Med Genet. (in press).
• [文献書誌] Zhou YX: "Spinocerebellar ataxia type 1 in China : molecular analysis and genotype-phenotype correlation in five families."Arch Neurol. (in press).
• [文献書誌] Shimazaki H: "Meiotic instability of the CAG repeats in the SCA6/CACNAIA gene in two Japanese SCA6 families."J Neurol Sci. (in press).
• [文献書誌] Namekawa M: "A large Japanese SPG4 family with a novel insertion mutation of the SPG4 gene : a clinical and genetic study."J Neurol Sci. (in press).
• [文献書誌] 法化図陽一: "Spinocerebellar ataxia type6(SCA6)の一家系:その臨床徴候を主体に."臨床神経. (印刷中).
• [文献書誌] 滝山嘉久: "遺伝性神経筋疾患の最新情報:Machado-Joseph病"内科. (印刷中).
• [文献書誌] Takiyama Y: "Single Sperm analysis of the CAG repeats in the gene for dentatorubral-pallidoluysion atrophy(DRPLA) : the instability of the CAG repeats in the DRPLA gene is prominent among the CAG repeat diseases"Hum Mol Genet. 8. 453-457 (1999)
• [文献書誌] Takiyama Y: "An unusual case of facial diplegia"Muscle & Nerve. 22. 778-779 (1999)
• [文献書誌] Kawakami T: "A case of McLeod Syndrome with unusually severe myopathy"J Neurol Sci. 166. 36-39 (1999)
• [文献書誌] 澤田幹雄: "運動ニューロン疾患、球脊髄性筋萎縮症と声帯麻痺"医学のあゆみ. 191. 833-835 (1999)
• [文献書誌] 滝山嘉久: "神経症候群11、晩発性皮質小脳萎縮症"日本臨床社. 4 (1999)