軟骨・非軟骨細胞におけるマイナーコラーゲン分子の発現機構及び生物活性に関する研究

• 研究課題/領域番号: 11470312
• 研究種目: 基盤研究(B)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 整形外科学
• 研究機関: 大分医科大学
• 研究代表者: 吉岡 秀克 大分医科大学, 医学部, 教授 (00222430)
• 研究分担者: 二宮 善文 岡山大学, 医学部, 教授 (70126241) ; 松尾 哲孝 大分医科大学, 医学部, 助手 (10284788) ; モハメド カレドザマン 大分医科大学, 医学部, 助手 (70305035) ; 調 恒明 大分医科大学, 医学部, 助教授 (50179058)
• 研究期間 (年度): 1999 – 2001
• 研究課題ステータス: 完了 (2001年度)
• 配分額: 14,800千円 (直接経費: 14,800千円); 2001年度: 2,800千円 (直接経費: 2,800千円); 2000年度: 2,800千円 (直接経費: 2,800千円); 1999年度: 9,200千円 (直接経費: 9,200千円)
• キーワード: マイナーコラーゲン / 遺伝子発現 / 軟骨 / 細胞外マトリックス / リコンビナントタンパク

研究概要

1.α1(XI)鎖コラーゲン遺伝子の発現調節機構の解析
ルシフェラーゼアッセイを用いて、プロモーター活性をみるとα1(XI)の発現細胞であるA204細胞では-199〜-65において、非発現細胞のHT1080細胞に比べ有意に上昇していた。この領域に結合する因子を検索する目的でゲルシフトアッセイを行った。その結果、-147〜-121に結合する因子が存在することがわかり、さらに変異を入れたコンストラクトを作製し解析を行った結果、-140〜-131の領域がこの因子の結合に重要であることがわかった。
2.α1(V)鎖コラーゲン遺伝子の発現調節機構の解析
マウスのプロモーター領域をルシフェラーゼアッセイを用いて解析した。α1(V)の産生細胞であるA204及びNIH3T3細胞においては-231〜+39の領域にプロモーター活性を認めた。一方、非産生細胞HT1080細胞においてはその活性が見られなかった。又、ゲルシフトを行い、-250〜-80の領域において三箇所のタンパクの結合する領域を同定した。そのうちの二箇所は同一又は類似の因子が結合してその活性を下げると思われ、残りの一箇所は逆に上げる因子の関与が考えられた。
3.α1(XI)鎖コラーゲンNプロペプチド(NPP)の機能解析
ヘパリンカラムを用いてリコンビナントのNppの溶出を調べると、このペプチドはヘパリンに対し有意に親和性が見られた。

研究成果

• [文献書誌] Nakano S, et al.: "Differential tissular expression and localization of type IV collagen"Laboratory Investigation. 79. 281-292 (1999)
• [文献書誌] Saito K, et al.: "Differential expression of mouse α5(IV) and a 6(IV) collagen gene"J.of Biochemistry (Tokyo). 128. 427-434 (2000)
• [文献書誌] Fujiwara S, et al.: "Epiplakin, a novel member of the plakin family"J.of Biological Chemistry. 276. 13340-13347 (2001)
• [文献書誌] Iyama K, et al.: "Differential expression of two exons of the a α1(XI) collagen gene"Matrix Biol.. 20.1. 53-61 (2001)
• [文献書誌] Sumiyoshi H, et al.: "Type XIX collagen is expressed transiently during myoblast"Dev.Dynamics. 220.2. 155-162 (2001)
• [文献書誌] Chen Y, et al.: "Cis-acting elements regulate alternative splicing"Matrix Biol.. 20.8. 589-599 (2001)
• [文献書誌] 二宮善文 他: "細胞外マトリックス"小出輝、林利彦 編. 544 (2000)
• [文献書誌] Fujiwara S et a!.: "Epiplakin, a novel member of the plakin family"J. Boil. Chem.. 276.16. 13340-13347 (2001)
• [文献書誌] Iyama K et a1.: "Differential expression of two exons of the α1(XI) collagen gene"Matrix Biol.. 20.1. 53-61 (2001)
• [文献書誌] Sumiyoshi H et al.: "Type XIX collagen is expressed transiently during myoblast"Dev. Dynamics. 220.2. 155-162 (2001)
• [文献書誌] Chen Y et al.: "Cis-acting elements regulate alternative splicing"Matrix Biol.. 20.8. 589-599 (2001)
• [文献書誌] 吉岡 秀克 他: "軟骨に発現するコラーゲン遺伝子の選択的スプライシング"Connective Tissue. (in press).
• [文献書誌] 住吉 秀明 他: "XIX型コラーゲンに関する最近の知見"Connective Tissue. (in press).
• [文献書誌] Saito K et al: "Differential expression of mouse α5(IV) and α6(IV) collagen gene"J.Biochem.. 128・3. 427-434 (2000)
• [文献書誌] Hirakawa S et al: "The brain link protein-1(BRALI)"Biochem.Biophys Res.Commun.. 276・3. 982-989 (2000)
• [文献書誌] Fujiwara S et al: "Epiplakin,a novel member of the plakin family"J.Biol.Chem.. (in press). (2001)
• [文献書誌] Iyama K et al: "Differential expression of two exons of the α1(XI) collagen gene"Matrix Biol.. (in press). (2001)
• [文献書誌] Sumiyosi H et al: "Type XIX collagen is expressed transiently during myoblast"Dev.Dynam.. (in press). (2001)
• [文献書誌] Nakano S et al: "Differential tissular expression and localization of type IV collagen"Laboratory Investigation. 79・3. 281-292 (1999)
• [文献書誌] 吉岡秀克: "マイナーフィブリル型コラーゲン分子の発現の多様性と機能"生化学. 71・6. 432-438 (1999)
• [文献書誌] 吉岡秀克: "フィブリル型コラーゲン遺伝子の転写調節機構"Connective Tissue. 31・3. 189-196 (1999)