| 研究課題/領域番号 |
11470515
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
病態検査学
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| 研究機関 | 北海道大学 |
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研究代表者 |
松野 一彦 北海道大学, 医療技術短期大学部, 教授 (70102332)
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| 研究分担者 |
千葉 仁志 北海道大学, 医学部・附属病院, 講師 (70197622)
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| 研究期間 (年度) |
1999 – 2000
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| 研究課題ステータス |
完了 (2000年度)
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| 配分額 *注記 |
5,900千円 (直接経費: 5,900千円)
2000年度: 1,900千円 (直接経費: 1,900千円)
1999年度: 4,000千円 (直接経費: 4,000千円)
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| キーワード | 血小板 / フローサイトメトリー / CD62P / CD63 / PAC-1 / 酸化LDL / CD36 / 活性化 / β-トロンボグロブリン |
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| 研究概要 |
血小板は血栓症の発症に関与していると考えられており、生体内の血小板活性化の状態を知ることは血栓症発症の予知などに有用と考えられる。最近、血小板活性化の測定に血小板表面への活性化抗原の発現をフローサイトメトリー(FCM)にて解析する方法が応用されているが、採血法、抗凝固剤の選択、固定時期、モノクローナル抗体の選択などその測定方法は一定していない。今回、FCMを用いた血小板活性化測定法の確立を目的として、基礎的検討および臨床応用について検討した。In vitroの検討では、活性化のマーカーとしてα顆粒由来のCD62P、ライソゾーム顆粒由来のCD63および活性化時のGPIIb/IIIa複合体を認識するPAC-1抗体が最も感度良く活性化を捉え、次いでライソゾーム顆粒に存在するLAMP-1、LAMP-2に対する抗体である抗CD107aおよびCD107b抗体も活性化を認識したが、トロンビンレセプター抗体であるSPAN12およびWADE15抗体では十分な活性化の把握は出来なかった。採血直後にパラアルデヒド固定あるいは直後にMoAbを添加した後に固定するのが最も望ましいが、ルーチン検査として採血する場合には抗凝固剤と抗血小板剤からなる抗凝固剤カクテルを用いてで採血すると採血後の活性化抗原の発現を抑制することができた。採血した直後に固定した未刺激の全血を用いてFCM法にてCD62P、CD63、PAC-1の発現をみると、健常群と比較し慢性透析群などの生体内の強い血小板活性化が疑われる群では有意に発現の増加がみられたが、糖尿病、ネフローゼ症候群などでは発現の増加傾向はみられるが統計学的に有意ではなかった。しかしながら、これらの群でもコラーゲン刺激後のCD62P、CD63の発現は有意に増加していた。CD36欠損群では陽性群に比べ酸化LDL刺激後のCD62P、CD63の発現は有意に低下していた。
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