酵母の色彩変化による機能的遺伝子診断法の開発と実用化

• 研究課題/領域番号: 11557018
• 研究種目: 基盤研究(B)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 展開研究
• 研究分野: 実験病理学
• 研究機関: 北海道大学
• 研究代表者: 守内 哲也 北海道大学, 遺伝子病制御研究所, 教授 (20174394)
• 研究分担者: 浜田 淳一 北海道大学, 遺伝子病制御研究所, 助教授 (50192703) ; 多田 光宏 北海道大学, 遺伝子病制御研究所, 助教授 (10241316)
• 研究期間 (年度): 1999 – 2000
• 研究課題ステータス: 完了 (2000年度)
• 配分額: 6,900千円 (直接経費: 6,900千円); 2000年度: 2,000千円 (直接経費: 2,000千円); 1999年度: 4,900千円 (直接経費: 4,900千円)
• キーワード: 酵母 / 遺伝子診断 / p53 / APC / PTEN / AIE-75 / ADE2

研究概要

1.APC yeast color assayの開発と臨床応用。
APCのcDNAは全長8.5kbあるのでこれを5つの領域に分割してストップコドンアッセイ系を作製した。領域IとIIのアッセイにはRNAを、領域III,IV,VのアッセイにはゲノムDNAを用いた。大腸癌では23例中12例(52%)が異常と診断された。さらにこれまで知られていなかった乳癌においても70例中13例(18%)に異常が見いだされ、塩基配列の決定により全てにクローナルな変異が証明された。
2.p53 dominance assayの開発と臨床応用。
p53遺伝子のdominant negative変異を検出する酵母アッセイ法を開発した。これは、野生型p53と変異型p53を同時に酵母に発現させ、どちらの形質が発現するかを色彩の変化で検出する方法である。神経膠芽腫では、dominant negative変異をもつ場合30歳台で発症するのに対し、resessive変異では50歳台に発症することが明らかになった。
3.PTEN stop coton assayの開発と臨床応用。
癌抑制遺伝子PTENの酵母アッセイ法を開発した。この方法では、PTEN遺伝子にナンセンス変異があると酵母は赤に、偽PTEN遺伝子が発現している場合にはピンクになる。PTEN変異のある症例には偽PTEN遺伝子発現がなく、PTEN変異がない症例では偽PTEN遺伝子が発現する相補的関係が証明された。

研究成果

• [文献書誌] Marutani,M: "Dominant-negative mutations of the tumor suppressor p53 relating to early onset of glioblastoma multiforme"Cancer Res.. 59. 4765-4769 (1999)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Kobayashi,I.: "Identification of an autoimmune enteropathy-related 75-kilodalton antigen"Gastroenterology. 117. 823-830 (1997)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Zhang,CL.: "Detection of PTEN nonsense mutation and psiPTEN expression in high-grade astrocytic tumors by a yeast-based stop codon assay"Oncogene. 19. 4346-4353 (2000)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Furuuchi,K.: "Somatic mutations of the APC gene in primary breast cancers"Am.J.Pathol.. 156. 1997-2005 (2000)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Hamada,J.: "Increased Oxidative DNA Damage in Mammary Tumor Cells by Continuous Epidermal Growth Factor Stimulation"J.Natl.Cancer Inst.. 93. 214-219 (2001)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Ozaki,T.: "Deletion of the C-terminal region of p73alpha enhances both its transactivation function and DNA-binding activity but inhibits induction of apoptosis"Cancer Res.. 59. 5902-5907 (1999)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Marutani M, Tonoki H, Tada M, Takahashi M, Kashiwazaki H, Hida Y, Hamada J, Asaka M and Moriuchi T: "Dominant negative mutations of the tumor suppressor p53 relating to early onset of glioblastoma multiforme."Cancer Res.. 59. 4765-4769 (1999)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Kobayashi I, Imamura K, Kubota M, Ishikawa S, Yamada M, Tonoki H, Okano M, Storch WB, Moriuchi T, Sakiyama Y, Kobayashi K: "Identification of an autoimmune enteropathyrelated 75-kilodalton antigen."Gastroenterology. 117. 823-830 (1999)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Zhang CL, Tada M, Kobayashi H, Nozaki M, Moriuchi T, Abe H.: "Detection of PTEN nonsense mutation and psiPTEN expression in central nervous system high-grade astrocytic tumors by a yeast-based stop codon assay."Oncogene.. 19. 4346-53 (2000)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Furuuchi K, Tada M, Yamada H, Kataoka A, Furuuchi N, Hamada J, Takahashi M, Todo S, Moriuchi T.: "Somatic mutations of the APC gene in primary breast cancers."Am J Pathol.. 56. 1997-2005 (2000)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Hamada J, Nakata D, Nakae D, Kobayashi Y, Akai H, Konishi Y, Okada F, Shibata T, Hosokawa M, Moriuchi T.: "Increased Oxidative DNA Damage in Mammary Tumor Cells by Continuous Epidermal Growth Factor Stimulation."J Natl Cancer Inst.. 93. 214-219 (2001)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Ozaki T, Naka M, Takada N, Tada M, Sakiyama S, Nakagawara A.: "Deletion of the COOH-terminal region of p73alpha enhances both its transactivation function and DNA-binding activity but inhibits induction of apoptosis in mammalian cells."Cancer Res.. 59. 5902-5907 (1999)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Zhang, CL.: "Detection of PTEN nonsense mutation and psiPTEN expression in high-grade astrocytic tumors by a yeast-based stop codon assay"Oncogene. 19. 4346-4353 (2000)
• [文献書誌] Furuuchi, K.: "Somatic mutations of the APC gene in primary breast cancers"Am.J.Pathol.. 156. 1997-2005 (2000)
• [文献書誌] Hamada, J.: "Increased Oxidative DNA Damage in Mammary Tumor Cells by Continuous Epidermal Growth Factor Stimulation"J.Natl.Cancer Inst.. 93. 214-219 (2001)
• [文献書誌] 守内哲也: "Identification of an autoimmune enteropathy-related 75-kilodalton antigen"Gastroenterology. 117. 823-830 (1999)
• [文献書誌] 守内哲也: "Somatic mutations of the APC gene in primary breast cancers"Am. J. Pathol.. (印刷中).
• [文献書誌] 守内哲也: "Dominant negative mutations of the tumor suppressor p53 relating to early onset of glioblastoma multiforme"Cancer Res.. 59. 4765-4769 (1999)
• [文献書誌] 守内哲也: "A functional and quantitative mutational analysis of p53 mutations in yeast indicates strand biases and different roles of mutations in DMBA- and BBN-induced tumors"Int. J. Cancer. 83. 700-705 (1999)
• [文献書誌] 守内哲也: "Distinct prognostic values of p53 mutation and loss of estrogen receptor and their cumulative effect in primary breast cancers"Int.J.Cancer. 89. 92-99 (2000)
• [文献書誌] 浜田淳一: "Increased E1AF expression in mouse fibrosarcoma promotes metastasis through induction of MT1-MMP expression"Oncogene. 18. 1771-1776 (1999)