| 研究課題/領域番号 |
11640649
|
|---|
| 研究種目 |
基盤研究(C)
|
| 配分区分 | 補助金 |
|---|
| 応募区分 | 一般 |
|---|
| 研究分野 |
植物生理
|
|---|
| 研究機関 | 岡山大学 |
|---|
研究代表者 |
高橋 裕一郎 岡山大学, 理学部, 助教授 (50183447)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
1999 – 2000
|
| 研究課題ステータス |
完了 (2001年度)
|
| 配分額 *注記 |
3,500千円 (直接経費: 3,500千円)
2000年度: 1,800千円 (直接経費: 1,800千円)
1999年度: 1,700千円 (直接経費: 1,700千円)
|
|---|
| キーワード | 光合成 / 光化学系 / アセンブリー / タグ / アフィニティクロマト / サブユニット組成 / 葉緑体形質転換 / 緑藻クラミドモナス / 光化学系複合体 / 生合成 / 葉緑体遺伝子 / Ycf4タンパク / タンパクの精製 / 葉緑体 / 光化学系1 / 形質転換 / タンパク質工学 / ヒスチジンタグ |
|---|
| 研究概要 |
光合成の電子伝達系で機能する光化学系1複合体は、膜タンパクを含む10以上のサブユニットと100以上のコファクターから構成される超分子複合体である。各構成成分が機能的な複合体へアセンブリーされる過程は明らかにされておらず、その反応を介添えする装置は同定されていない。我々はすでに葉緑体ゲノム上の機能不明な読み取り枠の一つycf4が光化学系1複合体のアセンブリーに必須な因子をコードすることを明らかにした。このYcf4タンパクに対する抗体を用いた解析の結果、Ycf4は新たに合成された光化学系1複合体と一過性的に結合し、さらにYcf4も大きな複合体を形成していることが明らかにされた。このYcf4複合体は光化学系1複合体のアセンブリー装置であると考えられるので、これをショ糖密度勾配超遠心法、イオン交換カラムクロマトグラフィー法、およびゲルろ過カラムクロマトグラフィー法を利用して精製した。精製度はまだ不十分で他のタンパクの混入が認められるが、この複合体のサイズは分子量180万であることを決定した。さらにYcf4複合体を精製するために、緑藻クラミドモナスの葉緑体形質転換系を利用してYcf4にタグを融合し、アフィニティークロマトグラフィーで複合体をさらに高度に精製することを試みた。異なる原理により生成したYcf4複合体の構成サブユニットを解析した結果、10以上のポリペプチドが存在することが初めて明らかにされた。
この研究と関連して、もう一つの光化学系2複合体の酸素発生系のマンガンクラスターのアセンブリーを部分的に阻害する反応中心タンパクD1のアミノ酸を置換した形質転換体の解析を進めている。その結果、D1のC末端領域の構造がマンガンクラスターの機能に重要であることを確かめた。
|
