| 研究課題/領域番号 |
11670029
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
解剖学一般(含組織学・発生学)
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| 研究機関 | 産業医科大学 |
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研究代表者 |
藤本 淳 産業医科大学, 医学部, 教授 (80080547)
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| 研究分担者 |
工藤 秀明 産業医科大学, 医学部, 講師 (40289575)
土肥 良秋 産業医科大学, 医学部, 助教授 (30258602)
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| 研究期間 (年度) |
1999 – 2000
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| 研究課題ステータス |
完了 (2000年度)
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| 配分額 *注記 |
2,000千円 (直接経費: 2,000千円)
2000年度: 500千円 (直接経費: 500千円)
1999年度: 1,500千円 (直接経費: 1,500千円)
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| キーワード | エンドセリン / 低酸素 / カドミウム / Weibel-Palade小体 / in situ hybridization / 免疫細胞化学 / エンドセリン変換酵素 / エンドセリン-1 / RT-PCR / 急性カドミウム中毒 / ヒト臍帯静脈内皮細胞 / 細胞培養 / mRNA |
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| 研究概要 |
研究実施計画に沿って、1)培養ヒト臍帯静脈内皮細胞(HUVEC)を材料とし、急性低酸素曝露刺激を与え、対照群とともに電顕観察したところ、実験群HUVECのWeibel-Palade(WP)小体は有意な増加を示すことが確認された。また、培養液中のエンドセリン(ET)-1濃度を測定し、対照群と比較したところ、急性低酸素曝露群ではWP小体の増加に相関したET-1濃度の上昇がみられた。2)ラット胸大動脈から95%N_2+5%CO_2混合ガス通気Hanks液を潅流した低酸素曝露群と、95%ルームエアー+5%CO_2混合ガス通気Hanks液を潅流した対照群の腹大動脈の電顕観察により、曝露群血管内皮細胞のWP小体が有意に増加することが示された。両群腹大動脈に対して、ET-1前駆体cRNAプローブを用いたin situ hybridizationを施行したところ、曝露群内皮でET-1前駆体(big ET-1)mRNAのシグナルの有意な増強が観察され、WP小体増加とET-1産生亢進に相関性が存在することが確認された。3)抗ラットET-1変換酵素(ECE-1)抗体を作製し、その特異性を確認したのち、WP小体増加とET-1放出亢進が我々によってすでに確認されている急性カドミウム中毒ラット胸大動脈を用いて、抗big ET-1抗体、抗ET-1抗体、および抗ラットECE-1抗体を用いた免疫細胞化学を施行した。光顕免疫細胞化学により、投与群内皮において、ET-1、およびECE-1の免疫陽性反応が有意に増強すること、免疫電顕により、WP小体内のET-1およびECE-1免疫陽性金粒子の局在性はともに投与群で増強することがそれぞれ示された。以上の結果から、急性カドミウム中毒ラット胸大動脈内皮細胞においてbig ET-1は、その免疫発現の増強から産生亢進が示唆されるECE-1によってWP小体において活発にET-1にプロセッシングされ、そのWP小体を介する調節分泌の亢進が示唆された。
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