| 研究課題/領域番号 |
11670211
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
実験病理学
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| 研究機関 | 大阪大学 |
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研究代表者 |
木村 透 大阪大学, 微生物病研究所, 助手 (50280962)
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| 研究分担者 |
仲野 徹 大阪大学, 微生物病研究所, 教授 (00172370)
伊川 正人 大阪大学, 遺伝情報実験施設, 助手 (20304066)
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| 研究期間 (年度) |
1999 – 2000
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| 研究課題ステータス |
完了 (2000年度)
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| 配分額 *注記 |
4,000千円 (直接経費: 4,000千円)
2000年度: 1,300千円 (直接経費: 1,300千円)
1999年度: 2,700千円 (直接経費: 2,700千円)
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| キーワード | 生殖系列 / 始原生殖細胞 / TNAP遺伝子 / Oct-3 / 4遺伝子 / トランスジェニックマウス / EGFP / Cre / loxPシステム / loxP系 / 生殖質 / germ cell-less(gcl)遺伝子 |
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| 研究概要 |
始原生殖細胞(PGC:primordial germ cells)は生殖細胞の前駆細胞である。PGCは、生殖系列の運命付け・形成・成立という発生過程を経るが、初代培養系しかアッセイ系がないため、その分子機構については不明の点が多い。そこで、PGC特異的なプロモーターをもつTNAP(tissue nonspecific alkaline phosphatase)およびOct-3/4遺伝子を用いて、以下のトランスジェニックマウスの作製を行った。
(1)TNAP遺伝子座に蛍光タンパクEGFP遺伝子をノックインしたマウスを作製した。このマウスを用いることにより、(i)生体内においてPGCを生きたまま可視化することに成功した。また、(ii)cell sorterを用いることにより、PGCの精製を、簡単に、生存率の高い状態で、ほぼ100%の純度で行うことが可能になった。種々のマウスと交配することにより、PGCの細胞・分子レベルでの解析に有用である。
(2)PGC特異的な遺伝子発現系のモデルとして、Oct-3/4遺伝子プロモーターの下流にloxPで挟み込んだEGFP遺伝子、更にその下流にβ-galactosidase遺伝子を連結したトランスジーンをもつトランスジェニックマウスを作製した。このマウスをTNAP遺伝子座に組換え酵素Cre遺伝子をノックインしたマウスと交配すると、Cre存在下でのみPGC特異的にβ-galactosidaseを発現できると考えられる。しかし、このマウスはCre非存在下ではPGCにおいてEGFPの蛍光を示したが、Cre存在下ではβ-galactosidase活性は検出限界以下であった。原因は、トランスジーンがタンデムに複数個導入されているのでEGFPについては強い発現が認められるが、Creの存在下ではトランスジーン間で組換えがおこりトランスジーン数が減少したことによると考えられた。
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