| 研究課題/領域番号 |
11670224
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
実験病理学
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| 研究機関 | 奈良県立医科大学 |
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研究代表者 |
趙 順規 奈良県立医科大学, 医学部, 助手 (90285362)
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| 研究分担者 |
小西 登 奈良県立医科大学, 医学部, 教授 (20145832)
平尾 佳彦 奈良県立医科大学, 医学部, 教授 (00133207)
植村 天受 奈良県立医科大学, 医学部, 講師 (90213397)
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| 研究期間 (年度) |
1999 – 2000
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| 研究課題ステータス |
完了 (2000年度)
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| 配分額 *注記 |
3,100千円 (直接経費: 3,100千円)
2000年度: 1,100千円 (直接経費: 1,100千円)
1999年度: 2,000千円 (直接経費: 2,000千円)
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| キーワード | 腎細胞癌 / MN / CA9 / プロモーター / DNAメチル化 / DNA メチル化 / プロモータ |
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| 研究概要 |
1.MN/CA9遺伝子5'領域のCpGメチル化とMN/CA9遺伝子発現の関係
ヒト腎細胞癌培養細胞株、ヒト腎細胞癌組織を用いてMN/CA9遺伝子5'領域のメチル化状態とMN/CA9発現を調べた結果、-74bpのCpGの低メチル化とMN/CA9発現の間に強い相関関係を認めた。メチル化状態はbisulfite genomic sequencing protocolで判定し、MN/CA9発現はRT-PCRで確認した。
2.メチル化阻害剤によるMN/CA9発現の誘導
MN/CA9遺伝子5'領域が完全にメチル化されているMN/CA9発現陰性のヒト腎細胞癌培養細胞株をメチル化阻害剤(5-aza-2'-deoxycytidine)投与下に1週間培養することにより、MN/CA9の発現が誘導されることを確認した。
3.MN/CA9プロモーター領域の同定
MN/CA9遺伝子5'領域(-1246/+42bp)をルシフェラーゼリポータープラスミドに組み込みExo/mung beans methodを用いたdeletion analysisを行った。これによりminimum promoterの5'側が-158bpと-58bpの間にあり、上記1で検討した-74bpのCpGがほぼプロモーター領域にあることを確認した。
4.MN/CA9プロモーター領域のCpGメチル化の転写活性に与える影響
MN/CA9プロモーター(-158/+42bp)上のすべてのCpGをCpGメチラーゼ(SssI)でメチル化した場合にプロモーター活性が著しく抑制されることを確認した。また、-74bpのCpGだけをCpGメチラーゼ(HhaI)でメチル化した場合も同様にプロモーター活性が強く抑制された。
以上の結果から、ヒト腎細胞癌におけるMN/CA9発現にプロモーター領域(-74bp)CpGの低メチル化が大きく関与していることが示唆された。
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